甘藍(lán)型油菜-蘿卜d染色體附加系中d染色體導(dǎo)入甘藍(lán)的初步研究.pdf

1、甘藍(lán)型油菜-蘿卜d染色體附加系(Rape-radish with d-chromosome addition line，AACC+dd，2n=40)是通過甘藍(lán)型油菜(Brassica nupus，AACC，2n=38)與蘿卜(Raphanus sativus，RR，2n=18)的雜交，經(jīng)雜種染色體加倍與母本多次回交獲得的具蘿卜d染色體的新型油菜材料。Peterka研究發(fā)現(xiàn)蘿卜9條染色體中——d染色體具有抗線蟲效應(yīng)，而蕓薹屬(Brassi

2、ca．CC，2n=18)植物則容易受線蟲病侵染。本試驗(yàn)?zāi)康南Ｍㄟ^甘藍(lán)型油菜-蘿卜d染色體附加系與甘藍(lán)的有性雜交，能夠獲得具有蘿卜d染色體的雜種后代，為選育具線蟲抗性的新型甘藍(lán)品種提供相關(guān)品種材料。 甘藍(lán)型油菜-蘿卜d染色體附加系與甘藍(lán)的雜交存在遠(yuǎn)緣雜交障礙，本試驗(yàn)選取染色體數(shù)目較多的附加系為母本、甘藍(lán)為父本進(jìn)行有性雜交，并通過人工干涉來促進(jìn)親和性提高。電鏡觀察父本花粉在附加系柱頭上的萌發(fā)情況，異源花粉刺激柱頭乳突細(xì)胞產(chǎn)生大量胼

3、胝質(zhì)以抵制花粉管的侵入，部分花粉管受阻，但仍有部分進(jìn)入柱頭并與胚珠結(jié)合。 花粉管能與雌配子結(jié)合是有性雜交成功的先決條件。在田間去雄授粉試驗(yàn)中，以甘氨酸(G1y 100mg/L)、赤霉素(GA3 60mg/L)、重復(fù)授粉及無特殊處理對照(CK)對柱頭進(jìn)行處理，發(fā)現(xiàn)：三種特殊處理方式對促進(jìn)雜交親和性都有一定作用。其中GA3 60mg/L能有效提高結(jié)籽率，重復(fù)授粉對促進(jìn)結(jié)角效果最好。胚胎挽救可為胚的形成提供必要的養(yǎng)分和激素。本試驗(yàn)以不

4、同發(fā)育天數(shù)的受精子房為培養(yǎng)對象，在不同培養(yǎng)基上進(jìn)行子房培養(yǎng)，共獲得26粒種子，并對不同子房天數(shù)和培養(yǎng)基效果進(jìn)行比較：(1)普遍以10天左右的受精子房進(jìn)行子房培養(yǎng)可獲得高結(jié)籽率。(2)子房在“White(1963)+VB6(0.5mg/L)+VB1(0.5mg/L)+甘氨酸(15mg/L)+煙酸(2.5mg/L)+IAA(1.5 mg/L)+蔗糖(50g/L)，pH=5.6”和“1/2MS+B5維生素+IAA(1.5mg/L)+蔗糖(50

5、g/L)，pH=5.8”這兩種培養(yǎng)基上均能獲得較高的結(jié)籽率，分別為3.37和4.26。 田間與離體培養(yǎng)獲得的再生植株在形態(tài)學(xué)上偏向母本，個別形態(tài)標(biāo)記如葉片形狀等處于父母本中間型，極少數(shù)植株出現(xiàn)不同于父母本的淺紫色莖桿。利用已知蘿卜d染色體的特異分子標(biāo)記引物OPE07-363與OPE03-518對子代與父母本DNA進(jìn)行RAPD實(shí)驗(yàn)，篩選出在363bp與518bp處有與母本d染色體特異帶型相同的子代植株4株，并通過SSR標(biāo)記與根尖細(xì)

6、胞染色體計數(shù)來鑒定雜種真實(shí)性。經(jīng)鑒定，子代植株DNA模板經(jīng)與引物結(jié)合、PCR擴(kuò)增電泳后于167bp與248bp處顯示出不同于父母本的差異帶型；對4株再生苗中存活的3株進(jìn)行細(xì)胞學(xué)鑒定，顯微鏡下觀察到根尖染色體數(shù)目分別是：29、29、48(或49)。即3株再生苗：2株三倍體(ACC+d，3x=29)，和1株五倍體(AACCC+dd，5x=49)或(AACCC+d，5x=48)。從而確定這三株植株確為附加系dox甘藍(lán)的真雜種。 花粉活