口蹄疫DNA疫苗pIRES-OAAT-P1-2A-3C免疫原性的初步研究.pdf

1、口蹄疫（Foot-and-Mouth disease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth disease virus，F(xiàn)MDV）引起偶蹄動(dòng)物的最烈性傳染病之一。目前FMD呈世界范圍流行趨勢(shì)。特別是近幾年來O型、A型和Asia I型FMD在我國周邊國家或東南亞地區(qū)時(shí)有發(fā)生，對(duì)我國養(yǎng)殖業(yè)構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅。
　　以本室構(gòu)建的復(fù)合多表位表達(dá)盒OAAT及AsiaI型FMDV的P1-2A-3C為基礎(chǔ)構(gòu)建了FMDV核酸疫苗pI

2、RES-OAAT-P1-2A-3C。用限制性酶切對(duì)其進(jìn)行了鑒定。該DNA疫苗轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞表達(dá)的蛋白在間接免疫熒光(IFA)檢測(cè)中與O型FMDV多克隆血清和AsiaI型FMDV多克隆血清均能結(jié)合，在FITC標(biāo)記的二抗作用下經(jīng)伊文斯蘭染色可見較好的綠色熒光。
　　以BALB/c小鼠為試驗(yàn)動(dòng)物，應(yīng)用該DNA疫苗對(duì)小鼠進(jìn)行免疫接種后，檢測(cè)體液與細(xì)胞免疫指標(biāo)。研究結(jié)果表明，pIRES-OAAT-P1-2A-3C及滅活苗免疫組的小鼠均能產(chǎn)

3、生特異性抗體（與對(duì)照組相比，p<0.05）。pIRES-OAAT-P1-2A-3C免疫組抗Asia I、O抗體效價(jià)，低于滅活疫苗免疫組。但均高于空質(zhì)粒pIRE1neo對(duì)照組及PBS對(duì)照組（p<0.01）。流式細(xì)胞儀檢測(cè)所得數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果表明，與滅活苗、空質(zhì)粒pIRE1neo對(duì)照組及PBS對(duì)照組比較，用所構(gòu)建的DNA重組體DNA疫苗免疫的試驗(yàn)組小鼠的T淋巴細(xì)胞亞類CD4+和CD8+的數(shù)量顯著提高（p<0.05）。而各對(duì)照組之間差異不顯

4、著。用ELISPOT檢測(cè)小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌 IFN-γ斑點(diǎn)數(shù)試驗(yàn)結(jié)果表明，pIRES-OAAT-P1-2A-3C免疫組 IFN-γ斑點(diǎn)數(shù)量（64.726）較滅活苗（39.625）顯著增多（p<0.05）。而各對(duì)照組之間差異不顯著。應(yīng)用MTT法檢測(cè)淋巴細(xì)胞增殖結(jié)果顯示，pIRES-OAAT-P1-2A-3C和滅活苗組小鼠 T淋巴細(xì)胞均出現(xiàn)較明顯的特異性和非特異性增殖反應(yīng)。且pIRES-OAAT-P1-2A-3C組增殖能力強(qiáng)于滅活疫苗組（p

5、<0.05）。
　　給豚鼠進(jìn)行2次免疫，用250ID50的FMDV進(jìn)行攻擊，觀察其保護(hù)效果。滅活疫苗組4只豚鼠均未出現(xiàn)任何 FMD癥狀，表明獲得完全保護(hù)。pIRES-OAAT-P1-2A-3C組有2只獲得完全保護(hù)。說明該疫苗具有一定保護(hù)效果。
　　上述結(jié)果證實(shí)了表達(dá)盒OAAT與P1-2A-3C的表達(dá)組合在鼠體內(nèi)的良好的免疫原性。為其它載體應(yīng)用該組合進(jìn)行疫苗研制提供了試驗(yàn)依據(jù)。為研制有效的口蹄疫多價(jià)苗的作了一定的試驗(yàn)準(zhǔn)備并提供