利用水稻懸浮細(xì)胞檢測水稻白葉枯病菌突變菌株的致病性研究.pdf

1、水稻抗白葉枯病基因Xa23是從我國普通野生稻(Oryza rufiogon)中鑒定出來的優(yōu)良基因，對(duì)國內(nèi)外鑒別菌系表現(xiàn)為高抗、完全顯性和全生育期抗病。目前未發(fā)現(xiàn)能克服Xa23基因抗性的白葉枯病天然菌株。利用Tn5轉(zhuǎn)座系統(tǒng)構(gòu)建了Xa23鑒別菌株P(guān)6的突變體庫，約2.4萬個(gè)突變菌株，期望從中檢測出能使攜帶Xa23基因的水稻材料感病的白葉枯菌株。 目前鑒定白葉枯菌致病菌株的方法主要采用水稻植株剪葉接種法和注射接種法，這兩種方法工作量大

2、，且往往受水稻生長季節(jié)等條件的制約。在實(shí)驗(yàn)室條件下，研究利用水稻懸浮細(xì)胞系檢測P6突變體致病性實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，為在細(xì)胞水平篩選和研究其它病原菌提供新的思路。研究結(jié)果如下： 1、以水稻中野1號(hào)的成熟胚為外植體，在pH值為5.8的N6誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織，25℃黑暗條件下繼代培養(yǎng)3個(gè)月后，可以得到大量胚性愈傷組織。選擇淡黃色、質(zhì)地疏松的胚性愈傷組織為懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞來源，并在pH值為5.6的N6液體繼代培養(yǎng)基中，26℃，110-130r

3、pm,暗光條件下進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，再經(jīng)過4-6次繼代，可獲得理想懸浮細(xì)胞系。 2、親和菌株XMS-25、XMS-30誘導(dǎo)的水稻細(xì)胞死亡率低，在1-78h內(nèi)與未經(jīng)處理的對(duì)照無明顯差異，表明親和性菌株不能誘導(dǎo)水稻懸浮細(xì)胞過敏性反應(yīng)(Hypersensitive reaction，HR)。在非親和菌株P(guān)6和懸浮細(xì)胞非親和性互作中，48h前互作體系的死亡率和抽提液的顏色變化均不明顯；48-60h之間，懸浮細(xì)胞死亡率逐漸增加，抽提液的顏色也逐

4、漸加深；60h后，細(xì)胞死亡率增至最大，細(xì)胞死亡率和抽提液的顏色的變化均趨于穩(wěn)定。這說明：懸浮細(xì)胞在48h后開始大量死亡，也說明非親和菌株能誘導(dǎo)水稻懸浮細(xì)胞產(chǎn)生HR。 本研究建立了攜帶Xa23基因的水稻品種中野1號(hào)的懸浮細(xì)胞系，系統(tǒng)研究了懸浮細(xì)胞與白葉枯菌P6及其突變體致病菌株的互作，發(fā)現(xiàn)中野1號(hào)懸浮細(xì)胞與致病菌株互作中存在強(qiáng)烈的HR，溴酚藍(lán)染色細(xì)胞抽提液的顏色和OD595值可以作為檢測致病菌株與非致病菌株的指標(biāo)，建立了利用水稻懸