初步探討Sema4C在乳腺癌免疫逃逸中的作用.pdf

1、目的：探討原發(fā)性浸潤性導(dǎo)管癌腫瘤局部Sema4C的表達(dá)情況與CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和CD68+巨噬細(xì)胞浸潤情況的相關(guān)性，以及各指標(biāo)與臨床病理特征之間的關(guān)系。同時(shí)，體外研究Sema4C是否通過調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞表面MHC-Ⅰ類分子、MHC-Ⅱ類分子和共刺激分子的表達(dá)，以及細(xì)胞因子的分泌而影響T細(xì)胞活化、增殖和分化。
　　方法：在華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院病理科收集22例原發(fā)性乳腺浸潤性導(dǎo)管癌石蠟標(biāo)本并作連續(xù)切片，H&E染色

2、觀察組織形態(tài)，免疫組織化學(xué)法和圖像分析軟件檢測Sema4C的表達(dá)情況、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和CD68+巨噬細(xì)胞的浸潤情況，SPSS統(tǒng)計(jì)分析軟件分析Sema4C與CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、CD68+巨噬細(xì)胞和CD4/CD8比值之間的相關(guān)性，以及各指標(biāo)與臨床病理特征之間的關(guān)系。體外應(yīng)用密度梯度離心法和貼壁法分離和培養(yǎng)健康成人外周血單核/巨噬細(xì)胞，Sema4C-siRNA和Sema4C重組蛋白處理細(xì)胞3天后，普通光學(xué)顯微鏡觀察

3、細(xì)胞形態(tài)變化，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面HLA-A,B,C、HLA-DR,DP,DQ、共刺激分子如CD58、CD54、CD86、CD80和CD40的表達(dá)情況，ELISA檢測細(xì)胞因子如TGF-β1、IL-6、IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的分泌情況。將不同方式處理后的巨噬細(xì)胞與流式分選的人外周血CD3+T細(xì)胞混合培養(yǎng)7天后，流式細(xì)胞術(shù)檢測T細(xì)胞增殖和亞群分化情況。
　　結(jié)果：22例浸潤性導(dǎo)管癌的免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，Sema

4、4C高表達(dá)、較少的CD4+T和CD8+T細(xì)胞浸潤、CD4/CD8比值偏低（<1）與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)（P<0.01），而與其它臨床病理特征如年齡、腫瘤大小、WHO分級、ER表達(dá)、PR表達(dá)和HER2表達(dá)無相關(guān)性（P>0.05），同時(shí)Sema4C與CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞浸潤量和CD4/CD8比值呈負(fù)相關(guān)，與CD68+巨噬細(xì)胞浸潤量無關(guān)。體外培養(yǎng)所得的貼壁細(xì)胞具有典型的巨噬細(xì)胞形態(tài)，CD11b細(xì)胞陽性率為（89.47±1.10）％，其

5、中CD68陽性細(xì)胞占CD11b陽性細(xì)胞的（92.37±2.11）％。Sema4C及其受體plexin B2在巨噬細(xì)胞中均表達(dá)，應(yīng)用脂質(zhì)體2000介導(dǎo)siRNA轉(zhuǎn)染可抑制巨噬細(xì)胞Sema4C的表達(dá)，且轉(zhuǎn)染率為（96.17±2.45）％。Sema4C-siRNA和Sema4C重組蛋白處理3天后，巨噬細(xì)胞表面分子的表達(dá)率在空白對照組、Sema4C-siRNA組、Sema4C組（100ng）和Sema4C組（800ng）中，CD58分別為（87

6、.00±1.13）％、（87.40±1.41）％、（81.70±0.14）％和（20.20±6.51）％；CD54分別為（94.90±0.71）％、（92.25±0.92）％、（92.85±1.20）％和（46.70±8.62）％；CD86分別為（35.15±0.64）％、（37.85±1.63）％、（32.75±5.44）％和（4.45±0.72）％；其中，各指標(biāo)在Sema4C組（800ng）與其它三組間的表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<

7、0.05）。在空白對照組、Sema4C-siRNA組和Sema4C組（800ng）中，TGF-β1分泌濃度分別為（1.54±0.35）ng/mL、（1.27±0.26）ng/mL、和（2.01±0.16）ng/mL；IL-6分泌濃度分別為（1.04±0.06）ng/μL、（0.61±0.11）ng/μL、和（1.89±0.10）ng/μL，Sema4C組與其它兩組組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。巨噬細(xì)胞與T淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)后，與空

8、白對照組比較（增殖指數(shù)=5.19±1.07），Sema4C組T細(xì)胞增殖被顯著抑制（增殖指數(shù)=2.21±0.35，P<0.05），而Sema4C-siRNA組無明顯差異（增殖指數(shù)=5.55±1.02，P<0.05）。在空白對照組、Sema4C-siRNA組和 Sema4C組中，IL17+CD4+T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞比例分別為（11.40±1.04）％、（11.98±2.40）％和（32.99±5.43）％，Sema4C組與其它兩組間差異