促紅細胞生成素對腦白質軟化新生鼠膠質纖維酸性蛋白和神經(jīng)行為學的影響.pdf

1、研究背景:
　　隨著圍產(chǎn)醫(yī)學及新生兒重癥監(jiān)護技術的發(fā)展，早產(chǎn)兒存活率較前明顯增加，隨之而來的是早產(chǎn)兒腦損傷的發(fā)病率的升高。這一問題已愈來愈受到關注，早產(chǎn)兒腦損傷的發(fā)病機制已成為醫(yī)學界研究的熱點。早產(chǎn)兒腦室周圍白質軟化（periventricular leukomalacia，PVL）是早產(chǎn)兒最常見的腦損傷類型，可引起痙攣性腦性癱瘓、認知及行為學異常等后遺癥。促紅細胞生成素（Erythropoietin，EPO）作為造血因子除了用于

2、早產(chǎn)兒貧血的治療外，在早產(chǎn)兒腦損傷中也具有神經(jīng)保護作用。故本實驗通過對3日齡SD大鼠單側頸總動脈結扎+缺氧建立PVL模型的基礎上給予EPO進行干預，從病理形態(tài)學、膠質纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）免疫組織化學及遠期神經(jīng)行為學試驗檢測大鼠的神經(jīng)運動功能、情感能力和Y-迷宮刺激試驗檢測學習和記憶情況從而探索EPO對PVL新生鼠的神經(jīng)保護作用。
　　目的:
　　通過對3日齡

3、新生鼠腦室周圍白質軟化模型的建立探討EPO對早產(chǎn)腦白質損傷鼠的神經(jīng)保護作用，為臨床早期干預早產(chǎn)兒腦白質損傷提供一定的理論依據(jù)。
　　方法:
　　150只3日齡（P3）SD大鼠隨機分為對照組和實驗組，實驗組又分為實驗1組（EPO治療組）和實驗2組（PVL組）。對照組僅分離左側頸總動脈，不結扎不缺氧。實驗組大鼠結扎左側頸總動脈，于術后在6％氧氣+94%氮氣混合氣中缺氧2.5小時。實驗1組（EPO治療組）在實驗組基礎上腹腔注射EP

4、O5000 U/kg而實驗2組（PVL組）在實驗組基礎上腹腔注射等量的生理鹽水。分別于術后3d、7d、14d、21d測量體質量后斷頭取腦測量腦重量、腦質量損傷百分比，石蠟包埋切片行常規(guī)HE染色、GFAP免疫組化，剩下的大鼠于生后30d進行神經(jīng)行為學試驗（懸吊試驗、曠場試驗）和Y-迷宮刺激試驗分別檢測大鼠遠期的神經(jīng)運動功能、情感能力和學習記憶情況。
　　結果:
　　1.行為學：對照組大鼠術后無明顯行為改變，PVL組和EPO組大

5、鼠缺血缺氧后均出現(xiàn)異常行為學改變，EPO組大鼠主要表現(xiàn)為嗜睡，較易激惹，部分鼠偏向一側爬行或不能翻身，吃奶及活動稍減少，動作不協(xié)調，PVL組不僅表現(xiàn)為嗜睡，易激惹，大多數(shù)鼠偏向一側爬行或不能翻身，吃奶及活動明顯減少，有的可見全身發(fā)紺，躁動不安，四肢抽動，甚至死亡。
　　2.體質量增長：術后3d、7d及14d PVL組術后體質量增長明顯落后于EPO組和對照組，差異有統(tǒng)計學意義[術后3d：（9.8±0.62）比（11.7±0.80）、

6、（13.8±0.41），術后7d：（12.1±0.46）比（16.1±0.62）、（18.2±0.53），術后14d：（23.5±0.89）比（28.4±0.62）、（33.8±0.71），P均<0.05]；
　　3.腦質量/體質量：術后1d PVL組及EPO組大鼠腦質量/體質量均大于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義[（5.37±0.38）、（3.83±0.22）比（2.92±0.32），P<0.01]，術后21d PVL組及 EPO組

7、大鼠腦質量/體質量均小于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義[（2.61±0.11）、（2.81±0.07）比（3.70±0.05），P<0.01]；
　　4.腦質量損傷%：PVL組和EPO組各時間點的腦質量損傷%隨著日齡的增加而增大，且術后1d、7d及21d腦質量損傷%均大于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義[術后1d：（27.74±7.25）、（13.36±5.40）比（0.29±0.47），術后7d：（37.65±8.12）、（25.32±6

8、.51）比（0.37±0.17），術后21d：（40.95±11.34）、（34.38±10.37）比（0.18±0.08），P均<0.05]；
　　5.HE染色：HE染色示術后7d對照組結構正常，皮質下白質及胼胝體神經(jīng)纖維束形態(tài)及走向清晰，PVL組可見皮質下及胼胝體結構松散，胼胝體神經(jīng)纖維束紊亂、呈現(xiàn)疏松網(wǎng)狀，EPO治療組皮質下結構基本正常，胼胝體神經(jīng)纖維束走向較清晰，胼胝體神經(jīng)纖維束結構基本正常；術后21d對照組側腦室正常，E

9、PO組側腦室三角區(qū)稍微擴大，PVL組側腦室三角區(qū)擴大明顯；
　　6.免疫組織化學：免疫組織化學結果顯示術后3d與對照組、EPO組相比 PVL組GFAP陽性細胞數(shù)目出現(xiàn)增多（P<0.05），術后7d與對照組相比EPO組和PVL組GFAP陽性細胞均明顯增多（P<0.05），且PVL組增多更為明顯（P<0.05）；術后14d EPO組與PVL組GFAP陽性細胞數(shù)開始回落，但仍多于對照組（P<0.05）， PVL組陽性細胞數(shù)仍然比EPO組

10、多（P<0.05），術后21d各組GFAP陽性細胞數(shù)基本回落至正常水平；
　　7.神經(jīng)行為學試驗:神經(jīng)行為學試驗懸吊試驗中PVL組鼠大部分反應遲鈍，很少有肢體活動，極易從玻璃棒上掉下，PVL組及EPO組大鼠懸吊試驗的分數(shù)均低于對照組大鼠，差異有統(tǒng)計學意義[（1.00±0.76）、（2.38±0.91）比（3.87±0.83），P<0.05]，曠場試驗中PVL組鼠大部分行為及其遲緩，穿越方格數(shù)很少，分數(shù)均低于對照組及EPO組且具有統(tǒng)

11、計學意義[（5.00±1.20）比（7.37±0.92）、（10.12±1.24），P<0.05]；
　　8.Y迷宮試驗:Y迷宮試驗中PVL組及EPO組所需訓練次數(shù)較對照組多且有統(tǒng)計學差異[（31.25±2.60）、（25.1±1.89）比（19.63±3.38），P<0.05]，24小時后記憶保持率 PVL組相比 EPO組、對照組低且差異具有統(tǒng)計學意義[（43.0±5.65）比（56.4±9.18）、（75.4±5.51），P<

12、0.05]，以PVL組24小時后記憶保持率最低。
　　結論:
　　1.通過對3日齡SD大鼠行單側頸總動脈結扎+缺氧2.5h可成功構建PVL模型；
　　2.腦白質軟化時GFAP陽性細胞表達增加，且損傷后3d開始出現(xiàn)，7d達高峰期，損傷后21天基本回落至低表達水平；
　　3.EPO能減少腦白質軟化后GFAP陽性細胞的表達，在神經(jīng)細胞損傷的修復中起到一定的作用；
　　4. EPO能在一定程度上改善腦白質軟化后大鼠