中藥護心靈對大鼠實驗性缺血心肌的保護作用及其機制研究.pdf

1、運用宏觀觀察、細胞培養(yǎng)等研究方法探討中藥護心靈對實驗性心肌缺血大鼠缺血復灌注后心肌保護作用及其分子機制，為護心靈的進一步推廣提供分子基礎。 本研究分為兩部分： 一、護心靈對急性心肌缺血的保護作用及對VEGF、bFGF及IMA的影響 方法：Wistar大鼠，隨機分為假手術組、生理鹽水組、復方丹參組和護心靈組4組，每組10只灌位給藥。復方丹參組按0.68g/kg體重給藥，護心靈組按200mg/kg體重給藥、用溫生理鹽

2、水配成體積分數為50％的混懸液。假手術組和生理鹽水組均采取灌胃給藥給予等容量的溫生理鹽水，每日1次，連續(xù)10天。末次給藥后1h，進行冠狀動脈結扎手術。用20％烏拉坦5ml/kg腹腔注射淺麻醉大鼠，背位固定，用橡皮球套住大鼠頭部，連接人工呼吸機進行人工呼吸，呼吸頻率大約為55次/min，頸動脈插管連接多導生理記錄儀。胸部去毛、常規(guī)消毒，沿左鎖骨中線縱行切開皮膚約2cm，于心尖搏動明顯處拉開胸廓，小心暴露心臟，剪開心包，輕壓右側胸廓，微微擠

3、出心臟，于左心耳根部與肺動脈圓椎間結扎左冠狀動脈，假手術組只在結扎部位穿線，不結扎。其余各組在缺血45min后恢復冠脈血流120min，心臟取血，取心臟后結束實驗。并對缺血再灌注后內皮素(endothelin，ET)、一氧化氮(nitrogenmonoxidum，NO)、血栓素B2(thromboxaneB2，TXB2)、6酮前列腺素F1a(6-keto-prostaglandinF1a，6-Keto-PGF1a)、TXB2/6-Ket

4、o-PGF1a比值血管內皮細胞生長因子(VEGF)、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)及缺血性修飾白蛋白(IMA)檢測，對心電圖Ⅱ導聯(lián)S-T段改變進行觀察。 結果：(1)ET、NO、TXB2、6-Keto-PGF1a及TXB2/6-Keto-PGF1a比值變化：實驗性心肌缺血大鼠缺血復灌注后生理鹽水組、復方丹參組和護心靈組ET、TXB2、TXB2/6-Keto-PGF1a比值顯著高于假手術組，NO及6-Keto-PGF1a顯著低

5、于假手術組，其中護心靈組P＜0.05，復方丹參組P＜0.01，復方丹參組和護心靈組與生理鹽水組比較則ET、TXB2、TXB2/6-Keto-PGF1a比值降低，組間有顯著性差異；NO及6-Keto-PGF1a升高，組間有顯著性差異。復方丹參組P＜0.05，護心靈組P＜0.01。(2)VEGF、bFGF及IMA變化：在心肌缺血再灌注后復方丹參組和護心靈組大鼠與生理鹽水組比較，VEGF、bFGF均出現顯著升高，其中復方丹參組P＜0.05，護

6、心靈組P＜0.01。假手術組VEGF、bFGF含量由于較少未檢測出；IMA含量生理鹽水組、復方丹參組和護心靈組與假手術組比較，則顯著升高，其中護心靈組P＜0.05，復方丹參組P＜0.01，而復方丹參組和護心靈組與生理鹽水組比較則顯著降低，復方丹參組P＜0.05，護心靈組P＜0.01。(3)心電圖Ⅱ導聯(lián)S-T段改變冠狀動脈結扎后30min后，生理鹽水組、復方丹參組和護心靈組大鼠心電圖Ⅱ導聯(lián)S-T段均抬高，T波高尖，呈急性心肌缺血改變，生理

7、鹽水組S-T段抬高明顯，與T波融合成拋物線，而復方丹參組和護心靈組的抬高幅度較小。缺血再灌注30min后各組大鼠心電圖S-T段仍然繼續(xù)抬高，但增加幅度逐漸下降，缺血再灌注30min后復方丹參組和護心靈組與生理鹽水組比較，S-T段抬高較輕(P＜0.01)。 結論：復方丹參和護心靈均能顯著提高急性缺血大鼠內皮源性因子NO及6-Keto-PGF1a、VEGF、bFGF水平，降低ET、TXB2水平，對大鼠實驗性缺血心肌均具有保護作用，其

8、中以護心靈組組間差異更大。同時能促進VEGF、bFGF的表達，而對照組沒有表達。提示這可能是HXL對抗心肌缺血的機制之一。 二、護心靈對缺氧培養(yǎng)的原代心肌細胞VEGF、bFGF表達的影響方法：Wistar大鼠30只隨機分空白對照組、HXL高劑量組(HXLmax)組和HXL低劑量組(HXLmin)組，每組10只，空白對照組灌胃給予生理鹽水10mL/kg體重、HXLmax組給予護心靈500mg/kg體重，HXLmin組給予護心靈20

9、0mg/kg體重。灌胃前依據體重計算HXL給藥量，生理鹽水配制成等體積混懸液，每日灌胃1次，連續(xù)14d后處死，心內采血，制備含藥血清。取出生1～2d內的Wistar乳鼠(雌雄不拘)，無菌條件下取心室肌，原代培養(yǎng)心肌細胞。原代培養(yǎng)第5d將心肌細胞隨機分為正常對照組(不加含藥血清)；生理鹽水組(加入僅給予生理鹽水的大鼠血清)；HXLmin組(加入給予藥物低劑量大鼠含藥血清)和HXLmax組(加入給予藥物高劑量大鼠含藥血清)。每組標本分成兩部

10、分，一半正常條件繼續(xù)培養(yǎng)24h，另一半置于缺氧條件下繼續(xù)培養(yǎng)24h后固定，用SABC法進行細胞免疫組化染色檢測VEGF、bFGF表達。 結果：正常條件培養(yǎng)的各組心肌細胞均無VEGF、bFGF表達；缺氧處理后各組細胞VEGF、bFGF均有表達。VEGF各組陽性細胞率分別為HXLmax組(20±2.9個/100細胞)，HXLmin組(26±1.8個/100細胞)，統(tǒng)計檢驗無差異(P＞0.05)。而生理鹽水組僅見零星表達(2±0.8個