豬α、β、γ干擾素在新城疫病毒LaSota株中的高效穩(wěn)定表達(dá)及抗病毒活性研究.pdf

1、干擾素(Interferon，IFN)是一類具有廣譜抗病毒、抗腫瘤和增強(qiáng)免疫功能的細(xì)胞因子，可作為免疫佐劑以提高疫苗的保護(hù)效力。一般情況下，天然干擾素難以直接提取純化和大量制各。豬病毒性疾病在養(yǎng)豬業(yè)生產(chǎn)中的危害較大，是影響?zhàn)B豬業(yè)健康發(fā)展最重要的一類疾病。因此，豬干擾素基因工程制品的研制與開發(fā)具有廣闊的應(yīng)用前景。 本研究利用RT－PCR技術(shù)克隆了豬干擾素－α基因(PoIFN和－α)和豬干擾素-γ基因(PoIFN-β)，并人工合成了

2、PoIFN-β基因。并以我國自行選育的一株新城疫病毒rLaSota弱毒疫苗株為載體，分別將豬干擾素-α基因(PoIFN-α)、豬干擾素-β基因(PoIFNo-β)和豬干擾素-Y基因(PoIFN-γ)插入NDV LaSota疫苗株基因組P和M基因之間，構(gòu)建了表達(dá)PoIFN-α、PoIFN-β和PoIFN-γ成熟蛋白的重組NDV全基因組cDNA克隆，通過反向遺傳操作分別拯救出穩(wěn)定表達(dá)豬干擾素-α、豬干擾素-β和豬干擾素-γ的重組NDV，rL

3、,aSota-PolFN-α、rLaSota-PoIFN-β和rLaSota-PoIFN-γ:通過RT-PCR檢測，擴(kuò)展到目的片段；通過免疫熒光檢測，觀察到被感染的BHK-21細(xì)胞膜上有強(qiáng)的熒光信號(hào):通過western-blot分析，檢測到特異反應(yīng)條帶；在BHK-21細(xì)胞系中檢測重組病毒抗病毒生物學(xué)活性，結(jié)果表明重組病毒表達(dá)的豬干擾素均可以不同程度地抑制VSV-GFP在BHK-21細(xì)胞系中的增殖并具有較高的抗病毒活性。干擾素的抗病毒作用