電針對兔膝骨關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)軟骨中KS表達(dá)的影響.pdf

1、 目的：骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis,OA)是一種極為常見的慢性關(guān)節(jié)疾病。關(guān)節(jié)軟骨進(jìn)行性退變是其主要的病理特征,最終可表現(xiàn)為關(guān)節(jié)軟骨軟化、纖維化、斷裂、脫落以及整個關(guān)節(jié)面的損傷,從而導(dǎo)致長期疼痛和功能障礙。OA 是老年人喪失勞動力的重要原因之一,且發(fā)病率逐年增加。誘發(fā)該病的因素有性別、年齡、肥胖、職業(yè)活動、損傷、遺傳等。OA 的診斷主要依據(jù)其臨床表現(xiàn),影像學(xué)以及生化標(biāo)志物的檢測。近年來,生化標(biāo)志物的檢測發(fā)展迅速,它對OA的早

2、期診斷,病變進(jìn)展觀察及藥物療效評價(jià)都有重要的臨床價(jià)值。研究發(fā)現(xiàn),硫酸角質(zhì)素(keratan sulfate,KS)是一種幾乎只存在于關(guān)節(jié)軟骨和椎間盤軟骨的聚集蛋白聚糖中的氨基多糖,它具有良好的精確性和可定量性,可作為直接標(biāo)記物來反應(yīng)關(guān)節(jié)軟骨代謝的情況。OA 的治療方法較多,主要包括藥物治療和非藥物治療,其中針灸治療是已被廣泛認(rèn)同的較為有效的非藥物治療方法,而電針作為傳統(tǒng)針灸和現(xiàn)代電生理學(xué)相結(jié)合的產(chǎn)物,既有針刺穴位的優(yōu)點(diǎn),又結(jié)合了電的生理

3、效應(yīng),提高了普通針刺的療效,現(xiàn)已普遍運(yùn)用于臨床。因此本實(shí)驗(yàn)以兔膝關(guān)節(jié)伸直位管型石膏造模法造模,用電針為干預(yù)措施,通過檢測關(guān)節(jié)軟骨中KS的表達(dá),來探討電針治療膝OA的可能作用機(jī)制。方法：(1)干預(yù)措施：選取6月齡健康新西蘭大耳兔 30 只,然后采用統(tǒng)計(jì)軟件產(chǎn)生隨機(jī)數(shù)字,依次將動物分為正常對照組,模型對照組,電針治療組。每組 10 只,采用兔膝伸直位管型石膏固定法對模型對照組和電針治療組建立模型。造模 6w 后,選用 30 號一寸毫針對電針

4、治療組實(shí)驗(yàn)兔取陽陵泉、梁丘、血海、足三里四個穴位進(jìn)針,得氣后連接 SDZ-Ⅱ型華佗牌電針治療儀,調(diào)整治療劑量為：4Hz疏波,20Hz密波,脈沖寬度0.5ms,每日20min,連續(xù)治療10d。正常對照組和模型組于喂養(yǎng)6w后采用空氣栓塞法處死,切開左膝關(guān)節(jié),取左側(cè)股骨內(nèi)側(cè)髁至軟骨下骨大約為0.5cm×0.5cm×0.5cm的軟骨塊,用 10%中性福爾馬林溶液固定后,石蠟包埋、切片,HE 染色,觀察造模后相關(guān)指標(biāo)變化。治療組在進(jìn)行電針治療10

5、d后以同樣方法觀察治療后相關(guān)指標(biāo)改變情況。(2)觀察指標(biāo)：①肉眼觀察所有實(shí)驗(yàn)兔左膝關(guān)節(jié)大體形態(tài)變化以及是否有關(guān)節(jié)積液,按Mankin’s評分標(biāo)準(zhǔn)對軟骨大體形態(tài)進(jìn)行評分；②光鏡下觀察關(guān)節(jié)軟骨表面的光滑度、色澤、完整性,并按Mankin’s評分標(biāo)準(zhǔn)對光鏡觀察結(jié)果進(jìn)行評分；③免疫組化法檢測兔膝關(guān)節(jié)軟骨中KS 的表達(dá)：用抗兔 KS 的試劑盒檢測兔左膝關(guān)節(jié)軟骨中KS的表達(dá)。(3)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理,所有數(shù)據(jù)用x ±s表示

6、,對軟骨結(jié)構(gòu),軟骨細(xì)胞,潮線及HE染色行Mankin’s評分,并對評分及對各組 KS表達(dá)情況分別用t 檢驗(yàn)及單因素方差分析法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：(1)軟骨大體形態(tài)觀察：正常對照組軟骨表面光滑完整無裂隙,呈藍(lán)白色透明狀,未見明顯關(guān)節(jié)積液,按Mankin’s軟骨結(jié)構(gòu)評分均為0分；模型對照組軟骨表面粗糙,呈灰黃色,關(guān)節(jié)積液呈粘稠渾濁樣變；電針治療組軟骨表面較粗糙,但整體好于模型對照組,軟骨呈淡黃色,透明度低

7、于正常對照組,部分可見關(guān)節(jié)積液。(2)HE染色光鏡觀察：正常對照組鏡下軟骨結(jié)構(gòu)清晰,細(xì)胞排列整齊有序,胞體圓潤,潮線完整,基質(zhì)染色均一,Mankin’s評分記為0分；模型對照組鏡下軟骨結(jié)構(gòu)粗糙,細(xì)胞排列紊亂,大小不一,可見團(tuán)簇狀聚集,潮線消失,基質(zhì)染色變淺；電針治療組鏡下軟骨結(jié)構(gòu)較完整,細(xì)胞排列比較規(guī)則,少見簇集,潮線基本完整,基質(zhì)染色較正常對照組稍淺。對3組軟骨細(xì)胞及結(jié)構(gòu)進(jìn)行Mankin’s評分,并對模型對照組和電針治療組評分結(jié)果進(jìn)行

8、t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(3)免疫組化測定KS的表達(dá)：進(jìn)行三組間兩兩比較。正常對照組分別與模型對照組,電針治療組比較,模型對照組與電針治療組比較,對所得結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析法統(tǒng)計(jì)分析,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：(1)采用兔膝關(guān)節(jié)伸直位管型石膏固定造模法能夠較好的模擬人類OA的病理特點(diǎn)及發(fā)生發(fā)展過程,本實(shí)驗(yàn)造模成功。(2)關(guān)節(jié)軟骨中的KS含量表達(dá)和OA的病程存在一定的相關(guān)性,可以很好的反映關(guān)節(jié)軟骨