黃牛脂聯(lián)素基因遺傳特性及在大腸桿菌中的表達研究.pdf

1、本研究采用PCR-SSCP和DNA測序技術，檢測了南陽牛、秦川牛、郟縣紅牛、晉南牛、中國荷斯坦牛5個群體的脂聯(lián)素基因(Acrp30)的遺傳變異，分析了其遺傳結構和遺傳多樣性，并對南陽牛、秦川牛和郟縣紅牛3個群體該基因的多態(tài)基因座與其生長性狀進行了關聯(lián)分析，以檢驗該基因的多態(tài)基因型對3個黃牛群體生長發(fā)育的遺傳效應，以期發(fā)現(xiàn)對重要經(jīng)濟性狀具有顯著效應的遺傳標記，為中國黃牛的高效選育和分子標記數(shù)據(jù)庫的建立、種質(zhì)資源保存與利用提供遺傳學依據(jù)。此

2、外，對秦川牛脂聯(lián)素基因進行了體外克隆、表達研究，為進一步的功能研究奠定了基礎。本研究獲得了以下結果： 1.脂聯(lián)素基因多態(tài)性及其與南陽牛、秦川牛、郟縣紅牛生長性狀的關聯(lián)分析共研究了5個群體的6個基因座。在內(nèi)含子2新發(fā)現(xiàn)2個SNP(+822 C>T和+866C>T，以起始密碼子ATG中的A作為+1來定義序列的相對位置，下同)，3’側翼區(qū)新發(fā)現(xiàn)1個SNP。5個牛群體Hardy-Weinberg平衡檢驗結果表明，內(nèi)含子2上的SNP位點處

3、于非平衡狀態(tài)。多態(tài)信息含量分析結果表明，除內(nèi)含子2(+822 C>T)為中度多態(tài)外，其它位點均為低度多態(tài)。基因型分布的卡方獨立性檢驗顯示，在內(nèi)含子2基因型分布差異比較大，各品種間均差異極顯著(P<0.01.)，3’側翼區(qū)基因型分布在各品種間差異均不顯著(P<0.05.)。在編碼區(qū)未發(fā)現(xiàn)SNP。利用最小二乘擬合線性模型，對：內(nèi)含子2和3’側翼區(qū)多態(tài)位點不同基因型與黃牛部分經(jīng)濟性狀進行顯著性檢驗，結果表明，不同基因型與南陽牛、秦川牛和郟縣紅

4、牛3個群體的經(jīng)濟性狀無顯著關聯(lián)。 2.脂聯(lián)素基因啟動子區(qū)多態(tài)性及其序列分析在啟動子區(qū)3個基因座中，在P1基因座(-9862.-10333)新發(fā)現(xiàn)5個點突變(-10241G>T、-10171 C>T、-10007 G>C、-9886 C>T、-9936 C>G)以及1處插入突變(-9940-9939 ins 67bp)。在P3基因座(-10598.-11080)新發(fā)現(xiàn)1個點突變(-10997 C>T)以及1處缺失突變(-10744

5、-10740 delGATTA)。對P1和P3基因座的插入和缺失基因型分布的卡方獨立性檢驗顯示，奶牛與檢測的地方黃牛存在顯著差異(P<0.05)，但各群體在兩個位點的PIC均小于0.20。通過對啟動子區(qū)的轉錄因子結合位點的分析發(fā)現(xiàn)，在P1基因座存在一個固醇調(diào)節(jié)元件相關蛋白(SREBP)結合位點，兩個過氧化物酶體增殖物活化受體(PPAR)的結合位點以及一個碳水化合物反應元件(ChRE)。在P3基因座存在兩個增強子結合蛋白(C/EBP)的結

6、合位點及過氧化物酶體增殖物活化受體(PPAR)的結合位點。通過序列分析發(fā)現(xiàn)，P1位點的插入序列實際上造成了一個可變拷貝，在這個插入序列中包含了一個碳水化合物反應元件(ChRE)，而P3位點的缺失突變則導致一個增強子結合蛋白(C/EBP)結合位點的產(chǎn)生。 3.秦川牛脂聯(lián)素基因的克隆、表達本試驗利用Overlap-PCR技術首次擴增獲得秦川牛脂聯(lián)素基因全長CDS序列。脂聯(lián)素基因編碼區(qū)全長為723 bp，與GenBank公布序列的同源