陳化烤煙煙葉表面優(yōu)勢菌株的定量檢測與誘變增效研究.pdf

1、本文以復(fù)烤后新煙和煙葉表面篩選出的優(yōu)勢菌株為試材，采用熒光定量PCR技術(shù)對不同陳化階段煙葉表面優(yōu)勢菌株的DNA拷貝數(shù)進(jìn)行了定量檢測，采用微生物學(xué)、酶學(xué)和分子生物學(xué)等技術(shù)和手段對不同陳化時(shí)期煙葉的酶活性進(jìn)行測定；通過向復(fù)烤后煙葉表廈噴施優(yōu)勢菌株來研究微生物制劑對煙葉品質(zhì)的影響；同時(shí)利用復(fù)合誘變劑對煙葉表面優(yōu)勢菌株進(jìn)行誘變育種研究。研究結(jié)果如下： 1.煙葉表面優(yōu)勢菌株的DNA拷貝數(shù)的定量檢測及不同陳化時(shí)期烤煙煙葉中4種酶活性的動(dòng)態(tài)變

2、化。結(jié)果表明，隨著陳化時(shí)間的延長，巨大芽孢桿菌的DNA拷貝數(shù)呈先升高后降低的趨勢，在陳化6個(gè)月時(shí)的每克煙葉表面所含有的巨大芽孢桿菌的DNA拷貝數(shù)最多；4種酶的活性也呈先升高后降低的趨勢，在陳化6個(gè)月時(shí)酶活性達(dá)到最大值；化學(xué)成分含量呈下降趨勢。巨大芽孢桿菌的。DNA拷貝數(shù)的變化影響煙葉中酶活性及化學(xué)成分含量的變化，表明巨大芽孢桿菌是煙葉自然陳化的內(nèi)在動(dòng)力。 2.微生物制劑對復(fù)烤煙葉品質(zhì)的影響研究。采用熒光定量PCR技術(shù)對添加微生物

3、制劑的煙葉和對照的煙葉表面優(yōu)勢菌株DNA拷貝數(shù)進(jìn)行定量檢測，同時(shí)，測定了不同陳化時(shí)期復(fù)烤煙葉中4種酶活性和化學(xué)成分含量及中性香氣物質(zhì)含量。通過向復(fù)烤后烤煙煙葉表面接種巨大芽孢桿菌的處理效果表明，煙葉表面優(yōu)勢菌株的DNA拷貝數(shù)明顯高于對照煙葉，4種酶的活性顯著高于對照，化學(xué)成分含量及其比值更加協(xié)調(diào)，同時(shí)發(fā)酵煙葉中大多數(shù)香氣物質(zhì)成分含量與其對照相比表現(xiàn)為明顯的增加趨勢，證明利用優(yōu)勢菌株及其生物制劑是增進(jìn)陳化煙葉香氣質(zhì)量，縮短煙葉發(fā)酵周期的重

4、要途徑。 3.煙葉表面優(yōu)勢菌株的誘變育種研究。以從煙葉表面篩選得到的巨大芽孢桿菌(Bacillus megatherium)Bck為出發(fā)菌株，經(jīng)理化因子誘變處理，采用透明圈法進(jìn)行初篩，即在淀粉培養(yǎng)基和蛋白培養(yǎng)基平板上挑取Hc值(透明圈直徑與菌株直徑之比)都比較大的菌株，然后對這些菌株進(jìn)行搖瓶復(fù)篩，測發(fā)酵液α-淀粉酶和蛋白酶的活性，得到酶活性較高的菌株B8。其產(chǎn)生的α-淀粉酶活性是Bck的1.905倍，蛋白酶活性是Bck的2.22