MCP-1影響乳腺癌MCF-7細胞表型轉(zhuǎn)換和遷移的分子調(diào)控機制研究.pdf

1、乳腺癌是一種嚴重威脅女性健康的常見惡性腫瘤，而腫瘤轉(zhuǎn)移則是導(dǎo)致癌癥患者死亡的最主要原因。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤微環(huán)境與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，有報道表明腫瘤微環(huán)境中的趨化因子參與到了腫瘤轉(zhuǎn)移的過程中。炎癥趨化蛋白因子MCP-1，屬于CC趨化家族成員，為單基因編碼，在人類、大鼠、小鼠及兔等物種中高度保守，被證實與其特異性受體CCR2結(jié)合后在乳腺癌的轉(zhuǎn)移中起重要作用，但其誘導(dǎo)腫瘤轉(zhuǎn)移的具體機制并不清楚。
　　本研究中，首先通過細胞劃痕實驗及T

2、ranswell小室實驗證實MCP-1促進了乳腺癌MCF-7細胞的遷移及侵襲，并且通過Western blot、免疫熒光實驗及共聚焦實驗發(fā)現(xiàn)，MCP-1可以改變細胞形態(tài)，誘導(dǎo)細胞骨架重排，抑制E-cadherin的表達，上調(diào) Fibronectin、Vimentin表達，從而引發(fā) MCF-7細胞 EMT的發(fā)生。而RS102895(CCR2拮抗劑)處理之后，抑制了 MCP-1誘導(dǎo)的遷移、侵襲、細胞骨架重排及EMT發(fā)生。隨后通過Wester

3、n blot、免疫熒光實驗及熒光定量 PCR技術(shù)發(fā)現(xiàn)，MCP-1可以在轉(zhuǎn)錄后水平穩(wěn)定調(diào)轉(zhuǎn)錄因子Snail的表達，并促進其入核轉(zhuǎn)運。通過Western blot實驗進一步研究發(fā)現(xiàn)MCP-1可以通過活化MEK/ERK信號通路促進GSK-3β(ser9)磷酸化來抑制GSK-3β的活化，從而穩(wěn)定Snail的表達水平，進而促進乳腺癌MCF-7細胞的遷移和侵襲及EMT發(fā)生。U0126(MEK/ERK抑制劑)處理抑制了MCP-1介導(dǎo)的Snail的穩(wěn)定

4、進而反轉(zhuǎn)了MCP-1誘導(dǎo)的EMT發(fā)生，而LiCl處理后（GSK-3β抑制劑）促進了snail的穩(wěn)定，促進了MCF-7細胞的EMT發(fā)生。最后我們通過熒光定量 PCR、明膠酶譜實驗及ELISA實驗證實MCP-1可以通過ERK/GSK-3β信號通路上調(diào)MMP-2/9及VEGF的表達。
　　結(jié)果說明MCP-1與CCR2特異性結(jié)合后可通過MEK/ERK/GSK-3β信號通路來促進snail的穩(wěn)定從而誘導(dǎo)MCF-7細胞發(fā)生間充質(zhì)轉(zhuǎn)換及促進MC