SRK基因家族鑒定及其在自交不親和沙田柚中的表達(dá)分析.pdf

1、蕓香科柑橘屬類植物中沙田柚等具有典型自交不親和特性，然而關(guān)于其自交不親和分子機(jī)理至今未知，決定其自交不親和特性的關(guān)鍵決定因子仍未克隆。實(shí)驗(yàn)證實(shí)SRK(Slocus receptor kinase)基因是十字花科五個(gè)種引起自交不親和反應(yīng)的雌蕊決定因子。前期研究表明沙田柚(Citrus grandis Osbeck)中含有SRK同源基因，可能在沙田柚自交不親和中起關(guān)鍵作用。由于沙田柚基因組序列至今未公開，本研究基于甜橙（Citrus sis

2、ensis Osbeck）全基因組信息為參考，開展全基因組水平SRK家族成員鑒定，序列結(jié)構(gòu)分析，組織表達(dá)分析。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)以CsSRK基因保守結(jié)構(gòu)域進(jìn)行Blast，篩選后得到定位在甜橙9條染色體上的113個(gè)家族基因，預(yù)測其亞細(xì)胞定位，發(fā)現(xiàn)61個(gè)基因位于質(zhì)膜，36個(gè)基因位于線粒體，9個(gè)基因位于細(xì)胞質(zhì)，6個(gè)基因位于細(xì)胞核;
　　(2)同源性分析發(fā)現(xiàn)CsSRK13與At1g07650.1、At5g39390.1具

3、有較高同源性，且At1g07650.1、At5g39390.1基因在擬南芥中花蕾期特異高表達(dá);
　　(3)啟動(dòng)子順式作用元件預(yù)測發(fā)現(xiàn)，94個(gè)基因與生長發(fā)育相關(guān)，57個(gè)基因與茉莉酸反應(yīng)相關(guān)，35個(gè)基因與水楊酸反應(yīng)相關(guān)，27個(gè)基因與赤霉素相關(guān)，31個(gè)基因與脫落酸相關(guān)，15個(gè)基因與乙烯相關(guān)，8個(gè)基因與胚乳、種子等的形成相關(guān);
　　(4)以沙田柚花器官各組織為模板cDNA，Actin為內(nèi)參的半定量分析，發(fā)現(xiàn)CsSRK1、CsSRK8

4、5在花藥內(nèi)特異表達(dá)，CsSRK96、CsSRK96基因在子房特異表達(dá)，CsSRK10在葉特異表達(dá)，而CsSRK13在多組織內(nèi)均有表達(dá)，只是表達(dá)量有差異;設(shè)置Actin與GAPDH雙內(nèi)參的實(shí)時(shí)熒光定量分析發(fā)現(xiàn)有5個(gè)基因花瓣特異表達(dá)，3個(gè)基因花絲特異表達(dá)，1個(gè)基因花柄特異表達(dá)，22個(gè)基因花藥特異表達(dá)，2個(gè)基因花柱特異表達(dá)，2個(gè)基因子房特異表達(dá);
　　(5)錦橙五個(gè)發(fā)育時(shí)期果肉為模板cDNA，定量分析時(shí)發(fā)現(xiàn)CsSRK3、CsSRK20、

5、 CsSRK40隨著果實(shí)成熟表達(dá)量在210DAF(days after flower)時(shí)達(dá)到最高值，CsSRK5、CsSRK54、CsSRK58、CsSRK73、CsSRK94隨著果實(shí)成熟表達(dá)量越來越低，在240DAF時(shí)達(dá)到最低值;
　　(6)利用雙酶切的方法將CsSRK13基因與PGEX-6P-1構(gòu)建重組表達(dá)載體，用1.0mM/L的IPTG誘導(dǎo)6h后，可以很好的表達(dá)目的蛋白，該蛋白與GST標(biāo)簽連接，大約72kDa;預(yù)測該蛋白為跨