水稻OsAFC2基因的功能分析.pdf

1、水稻是重要的糧食作物，同時也是基因組研究的模式植物。真核生物的基因大多是由外顯子與內(nèi)含子相間組成的斷裂基因，且其正常表達伴隨著mRNA的精確剪接，繼而翻譯成功能不同的蛋白質(zhì)發(fā)揮作用。擬南芥中AtAFC2可以和幾種SR蛋白相互作用，SR蛋白會對下游可變剪切體產(chǎn)生影響，從而影響mRNA的可變剪切。然而在水稻基因研究中，關(guān)于調(diào)控mRNA可變剪切相關(guān)的報道較少，因此本研究克隆了水稻OsAFC2并對其功能進行了初步的探究。
　　1)通過對水

2、稻RNAi突變體庫的篩選，獲得了OsAFC2基因沉默的突變體植株;克隆OsAFC2基因，通過生物信息學對其分析，發(fā)現(xiàn)水稻OsAFC2基因與擬南芥中AtAFC2基因相似度較高，OsAFC2與AtAFC2蛋白序列一致性為70.05％;
　　2)亞細胞定位實驗表明，OsAFC2定位于細胞核內(nèi)，表明OsAFC2在細胞核內(nèi)發(fā)揮功能;
　　3)實時定量PCR結(jié)果表明OsAFC2在水稻的各個組織部位均有表達，其中在葉片中表達量最高，莖中表

3、達量最低;
　　4)構(gòu)建OsAFC2的沉默和過表達載體，轉(zhuǎn)化日本晴得到轉(zhuǎn)基因株系。通過鏈特異性轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，在RNAi轉(zhuǎn)基因植株中檢測到的特有可變剪切比對照增加了50.01％，過表達植株中可變剪切的數(shù)量也有所增加，說明水稻中OsAFC2基因正常水平的表達，能夠穩(wěn)定的調(diào)控下游SR蛋白以及可變剪切輔助因子，這與擬南芥中AtAFC2基因相似，沉默或過表達，都會擾亂SR蛋白磷酸化水平，影響下游可變剪切輔助因子間的相互作用，導致某些特