堿性脂肪酶高產(chǎn)誘變菌株產(chǎn)酶條件優(yōu)化及其堿性脂肪酶的高效分離純化.pdf

1、脂肪酶(EC3.1.1.3，甘油酯水解酶)是一類能催化長鏈脂肪酸甘油酯水解為甘油和長鏈脂肪酸(或者是此反應(yīng)的逆反應(yīng))的生物催化劑。它可以在油水界面上催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油，以及中間產(chǎn)物甘油一酯和甘油二酯。廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、洗滌、皮革、造紙等行業(yè)領(lǐng)域。 本文以實驗室保存的堿性脂肪酶高產(chǎn)誘變菌株Lp-11為出發(fā)菌株，通過菌種復(fù)壯，產(chǎn)酶條件優(yōu)化，從而提高菌株產(chǎn)酶量。并對其堿性脂肪酶進(jìn)行高效分離純化，以期降低純化成本，提高

2、堿性脂肪酶的活性回收率。 利用平板劃線法和平板涂布法對菌株Lp-11進(jìn)行菌種復(fù)壯，得到一株產(chǎn)脂肪酶活性相對最高且傳代穩(wěn)定的菌株：Lp-11-④。 利用逐因子試驗及正交設(shè)計等方法對菌株Lp-11-④進(jìn)行產(chǎn)酶條件的優(yōu)化。首先運(yùn)用逐因子試驗確定Lp-11-④產(chǎn)堿性脂肪酶的最適碳源和氮源分別為：葡萄糖和蛋白胨。然后在此基礎(chǔ)上利用正交試驗對其發(fā)酵培養(yǎng)基成分進(jìn)行優(yōu)化，最后得到其最佳培養(yǎng)條件為：葡萄糖0.5％；蛋白胨5.0％；Na2H

3、PO4 0.7％；KH2PO40.5％；Tween80 1.0％；橄欖油2.0％；培養(yǎng)基pH8.0；接種量3.0％(V/V)；種齡12h：轉(zhuǎn)速250r/min；溫度30℃，在此條件下培養(yǎng)(30h)發(fā)酵液酶活達(dá)到366.996U/ml，比優(yōu)化前提高84.541％。 對菌株Lp-11-④所產(chǎn)的堿性脂肪酶進(jìn)行高效分離純化。菌體發(fā)酵液經(jīng)雙水相萃取(ATPS)、Phenyl-Sepharose疏水作用層析處理，超濾濃縮后得到了純化后的堿性