褪黑素對肺腺癌A549細(xì)胞的增殖和遷移抑制作用及其機(jī)制的初步探討.pdf

1、目的：研究褪黑素對肺腺癌細(xì)胞系 A549的增殖、遷移能力的影響,并初步探討其可能的作用機(jī)制。
　　方法：以人肺腺癌細(xì)胞株A549為研究對象,分別用不同濃度(0.1、0.5、0.75、1.0、2.5、5.0 mmol/L)的Mel處理A549細(xì)胞,在不同的時間(1、3、7 d)后,用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測Mel對A549細(xì)胞增殖的影響;倒置顯微鏡下觀察A549細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。劃痕實驗檢測該藥對A549細(xì)胞遷移能力的影響。用免

2、疫熒光方法分析Mel處理對A549細(xì)胞中緊密連接相關(guān)蛋白Occludin細(xì)胞分布的影響。Western blot分析A549細(xì)胞經(jīng)Mel處理后MAPK信號通路相關(guān)蛋白及OPN,Occludin表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：Mel對A549細(xì)胞有明顯的增殖抑制作用,并呈濃度依賴性和時間依賴性,Mel對A549細(xì)胞抑制半數(shù)抑制濃度IC50為1.864 mmol/l;(2.0 mmol/L)Mel處理組A549細(xì)胞數(shù)量減少,形態(tài)由梭形變成不規(guī)

3、則形,細(xì)胞間間隙明顯增大,成單層生長。Mel可以明顯抑制細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力,隨著Mel濃度的增加和時間延長,其抑制細(xì)胞遷移作用增強(qiáng),(5.0mmol/L) Mel處理A549細(xì)胞24 h,其遷移率僅為20％。免疫熒光分析表明,Mel能夠促進(jìn)A549細(xì)胞中緊密連接相關(guān)蛋白Occludin細(xì)胞膜的分布,從而促進(jìn)緊密連接的形成。Western blot檢測顯示2.0 mmol/L濃度的Mel能顯著抑制JNK、p38的磷酸化,而使ERK磷酸化水平