創(chuàng)傷患者外周血單核細(xì)胞自噬變化與糖代謝及預(yù)后關(guān)系的研究.pdf

1、目的： 自噬是廣泛存在于真核細(xì)胞內(nèi)的一種生理現(xiàn)象，細(xì)胞在饑餓狀態(tài)下，會(huì)消化自己體內(nèi)的細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞器來度過難關(guān)，也稱之為“細(xì)胞自噬”。創(chuàng)傷后機(jī)體處于高代謝低合成狀態(tài)，出現(xiàn)機(jī)體能量不足；而細(xì)胞在饑餓狀態(tài)下自噬作用明顯增強(qiáng)，自噬體增加，進(jìn)而勢必影響機(jī)體機(jī)能的改變，最終對(duì)創(chuàng)傷患者的預(yù)后產(chǎn)生影響。因此本課題旨在通過研究單核細(xì)胞的自噬水平的變化及其與創(chuàng)傷程度、創(chuàng)傷后糖代謝和預(yù)后之間的關(guān)系，闡明創(chuàng)傷后外周血單核細(xì)胞自噬水平的變化規(guī)律，從而為創(chuàng)

2、傷患者的臨床治療提供新的思路和線索。 方法： 1.根據(jù)損傷嚴(yán)重度評(píng)分(injury severity score，ISS)或簡明損傷定級(jí)標(biāo)準(zhǔn)(abbreviated injury scale，AIS)將創(chuàng)傷患者分為輕傷組、重傷組、嚴(yán)重傷組，輕傷組(多發(fā)傷ISS<16，或部位傷AIS=1～2)、重傷組(16≤ISS<25，或AIS=3)、嚴(yán)重傷組(ISS>25，或AIS≥4)，同時(shí)設(shè)立健康對(duì)照組，分別于創(chuàng)傷后24 h、3d

3、、Sd、10 d采集外周血，采用密度梯度離心結(jié)合貼壁分離法分離創(chuàng)傷患者外周血單核細(xì)胞，應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡和透射電鏡觀察細(xì)胞自噬現(xiàn)象。 2.將分離得到的單核細(xì)胞進(jìn)行丹(磺)酰戊二胺(monodansylcadaverin，MDC，自噬體的特異染色劑)染色并裂解，應(yīng)用熒光分光光度計(jì)(激發(fā)光波長380nm、發(fā)射光波長525nm)測定熒光強(qiáng)度進(jìn)行定量分析。 3.于創(chuàng)傷后24h、3d、Sd檢測患者血糖水平，分析創(chuàng)傷后外周血單核細(xì)

4、胞自噬變化與血糖的相關(guān)性。 4.記錄入組創(chuàng)傷患者的感染并發(fā)癥等結(jié)局，分析創(chuàng)傷后外周血單核細(xì)胞自噬變化與預(yù)后的相關(guān)性。 結(jié)果： 1.本實(shí)驗(yàn)的透射電鏡觀察結(jié)果從形態(tài)學(xué)上證實(shí)了創(chuàng)傷患者外周血單核細(xì)胞自噬現(xiàn)象的存在，表現(xiàn)為雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬體位于細(xì)胞核旁，呈圓形或橢圓形，其內(nèi)包含細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞器。 2.在激光共聚焦顯微鏡觀察下，創(chuàng)傷患者外周血單核細(xì)胞的熒光顆粒(染色的自噬小體)明顯比正常對(duì)照組增多，且隨著創(chuàng)傷程度的加

5、重，熒光顆粒越多，著色也隨之加深。 3.與正常對(duì)照組比較，創(chuàng)傷患者外周血單核細(xì)胞MDC染色后OD值(反映自噬水平)明顯升高：輕傷組，單核細(xì)胞自噬水平在第5d達(dá)到高峰；重傷組，單核細(xì)胞自噬水平在第3d達(dá)到高峰；嚴(yán)重傷組，單核細(xì)胞自噬水平在創(chuàng)傷后24h內(nèi)達(dá)到高峰，有顯著性差異(P<0.05)。 4.與正常對(duì)照組比較，創(chuàng)傷后血糖升高，表現(xiàn)為創(chuàng)傷后高糖血癥。對(duì)外周血單核細(xì)胞自噬水平和創(chuàng)傷后血糖做散點(diǎn)圖及相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)創(chuàng)傷后高糖血