小瓜蟲重組抑動抗原的親和純化及免疫學(xué)特性分析.pdf

1、抑動抗原是小瓜蟲(Ichthyophthirius multifiliis)的主要保護(hù)性抗原之一，在誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生保護(hù)性免疫方面具有重要的作用，是研制小瓜蟲疫苗的主要候選抗原。 本實(shí)驗在構(gòu)建G1株和G5株兩種不同血清型小瓜蟲抑動抗原基因重組四膜蟲的基礎(chǔ)上，通過優(yōu)化培養(yǎng)重組四膜蟲(Tetrahymena thermophila，共三株分別簡稱G1株，52A株和52B株)，誘導(dǎo)重組四膜蟲表達(dá)不同血清型的小瓜蟲抑動抗原，采用非離子型去污

2、劑Triton X-114提取蟲體膜蛋白，通過親和層析法純化重組抑動抗原，采用ELISA、SDS-PAGE和Western-blotting分析重組抑動抗原的純度及其免疫學(xué)特性。結(jié)果表明： ①以小瓜蟲特異性單克隆抗體為配體的親和層析柱能夠特異性地結(jié)合重組四膜蟲所表達(dá)的抑動抗原蛋白，純化的G1株和52B株表達(dá)產(chǎn)物與G1株和G5株小瓜蟲抑動抗原的分子量和免疫原性相近，其分子量分別為44 kDa、45kDa(還原條件)或36 kDa、

3、38kDa(非還原條件)。 ②重組抑動抗原與天然抑動抗原之間既有共同點(diǎn)，也存在部分差異。具體表現(xiàn)為：兔抗G1株重組抑動抗原(Tet-G1-iAg)血清能識別G1株和52B株重組抑動抗原，同時與非重組四膜蟲(Neo)蟲體抗原存在交叉反應(yīng)；兔抗52B株重組抑動抗原(Tet-52B-iAg)血清不僅能識別同源的52A株、52B株重組抑動抗原，也能識別異源的G1株重組抑動抗原；而兔抗G1株小瓜蟲抑動抗原(Ich-G1-iAg)血清能夠識

4、別所有供試的天然或重組表達(dá)抑動抗原，不與四膜蟲蟲體抗原產(chǎn)生任何交叉反應(yīng)。 ③親和純化的重組抑動抗原(52B株)能誘導(dǎo)鰻鱺產(chǎn)生特異性的免疫應(yīng)答，抗體水平峰值期為免疫后的20-30d。 研究結(jié)果證明：以小瓜蟲特異性單克隆抗體為配體的親和層析柱可以用于小瓜蟲重組抑動抗原的提取和純化，且獲得高度純化的表達(dá)產(chǎn)物；血清學(xué)分析結(jié)果提示重組抑動抗原和天然抑動抗原免疫學(xué)特性基本一致；免疫試驗證實(shí)重組抑動抗原能誘導(dǎo)鰻鱺產(chǎn)生特異性的免疫應(yīng)答；