潛伏感染期偽狂犬病病毒EPO基因甲基化狀態(tài)分析.pdf

1、偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)是一種具有神經(jīng)嗜性的α型皰疹病毒，能在宿主體內(nèi)建立持久潛伏感染。豬是PRV的原發(fā)感染宿主，阻止PRV建立潛伏感染和清除體內(nèi)潛伏感染的病毒對于控制和根除偽狂犬病(Pseudorabies，PR)具有至關(guān)重要的作用。目前PRV建立潛伏感染的機(jī)理還不清楚。DNA甲基化在調(diào)控病毒基因組轉(zhuǎn)錄以及逃避宿主對寄生成分的限制和免疫系統(tǒng)監(jiān)視中起作用，DNA甲基化在PRV建立和維持潛伏感染狀態(tài)中的

2、作用尚未知。
　　2012年伊始，PR在河南省部分地區(qū)再次暴發(fā)。為探尋其中緣由，并為后期研究提供可靠試驗材料，對2012年3月至2013年6月間采集的疑似PR病料接種Vero細(xì)胞并經(jīng)gE-PCR擴(kuò)增，分離鑒定出4株P(guān)RV毒株，同時對該4株病毒的gE、TK和gD基因進(jìn)行克隆、測序及分析。序列分析顯示，與參考毒株相比，4株P(guān)RV河南分離株的gE、TK、gD基因某些核苷酸及氨基酸發(fā)生突變。遺傳進(jìn)化分析顯示，4株P(guān)RV河南分離株形成一個獨

3、立的小亞群，與中國其他地區(qū)2013年分離株親緣關(guān)系密切，與2013年前分離株的親緣關(guān)系較近，與歐洲、南美洲分離株的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，推測此4株河南分離株是國內(nèi)新型流行株。
　　用分離鑒定的PRV流行毒株感染試驗仔豬，復(fù)制PRV在宿主體內(nèi)潛伏感染建立與維持的過程，并在DNA和RNA水平上檢測IE180、EPO、LAT和gD基因的轉(zhuǎn)錄情況。結(jié)果顯示，病毒在宿主體內(nèi)潛伏后，LAT基因持續(xù)轉(zhuǎn)錄，而IE180、EPO和gD基因的轉(zhuǎn)錄停止，證明P

4、RV豬潛伏感染模型建立成功，為進(jìn)一步研究PRV乃至α-皰疹病毒潛伏感染機(jī)理提供可靠的實驗材料和數(shù)據(jù)。
　　為確定DNA甲基化在PRV潛伏感染期EPO基因啟動子區(qū)的分布情況，在對該基因啟動子區(qū)CpG島及相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子預(yù)測的基礎(chǔ)上，應(yīng)用硫化測序PCR方法檢測潛伏感染期EPO基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)。結(jié)果表明，在該基因啟動子區(qū)存在零星分散的甲基化位點，但這些散在的甲基化位點并不屬于對“GC”盒敏感的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點處，初步表明潛伏感染期PR