預(yù)防大鼠坐骨神經(jīng)修復(fù)中瘢痕粘連及促進神經(jīng)再生的作用研究.pdf

1、周圍神經(jīng)損傷在臨床上是一種十分常見的疾病，通常我們根據(jù)損傷時神經(jīng)有無缺損可將損傷分為兩大類。在處理前者時，我們可以通過兩神經(jīng)斷端間直接縫合神經(jīng)外膜或束膜的方法進行修復(fù)。處理后者時，在缺損節(jié)段較短的情況下通常臨床上延長或游離兩側(cè)的神經(jīng)斷端，以間接的方法縮短缺損間距離，在兩斷端對合后縫合神經(jīng)外膜或束膜。當出現(xiàn)的缺損超過一定程度而不能進行直接縫合時則要采用自體神經(jīng)移植。
　　回顧以往有關(guān)周圍神經(jīng)損傷的研究，我們發(fā)現(xiàn)研究人員主要將精力集中

2、在如何促進神經(jīng)再生，而忽略了對神經(jīng)修復(fù)過程中出現(xiàn)的抑制因素的研究，如疤痕及粘連的相關(guān)研究。在周圍神經(jīng)損傷后，由于膠原纖維增生會導(dǎo)致神經(jīng)吻合口處的瘢痕形成，阻礙再生軸突的延伸并且會導(dǎo)致神經(jīng)外膜與周圍肌肉筋膜組織形成粘連，嚴重時會進一步壓迫血管而影響神經(jīng)血運，很大程度上影響了神經(jīng)再生與功能恢復(fù)。目前，盡管顯微外科技術(shù)已迅速發(fā)展，但術(shù)后仍會在吻合口處形成不同程度的瘢痕，且神經(jīng)功能的恢復(fù)也不如人意。隨著研究的深入，“神經(jīng)再生室”作為一種新的觀念

3、被提出，研究發(fā)現(xiàn)在神經(jīng)修復(fù)過程中適當及合理的干預(yù)神經(jīng)再生外環(huán)境，將有效促進再生并減少修復(fù)過程中瘢痕及粘連的形成。
　　光化學(xué)組織黏合技術(shù)，是一種利用Nd-YAG連續(xù)激光發(fā)射器產(chǎn)生的532nm波長的綠激光激活化學(xué)物質(zhì)，可使含有膠原分子的組織間通過共價鍵交聯(lián)的方式實現(xiàn)組織間黏合并可達到防水閉合的程度，其作用機理是通過光生物化學(xué)反應(yīng)誘導(dǎo)組織間的電子發(fā)生轉(zhuǎn)移。由于這些優(yōu)點，我們擬將光化學(xué)組織粘合技術(shù)應(yīng)用應(yīng)用與周圍神經(jīng)損傷的修復(fù)中。由于可將

4、含有膠原的組織進行免縫合粘合，避免了由于進行斷端縫合在神經(jīng)吻合口處造成的二次損傷和異物反應(yīng)。因此，如果能將光化學(xué)組織粘合技術(shù)與周圍神經(jīng)損傷修復(fù)相結(jié)合，將有可能減少瘢痕的形成及與周圍組織發(fā)生粘連。
　　本課題中，我們應(yīng)用胎膜包裹自體神經(jīng)修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)10mm缺損，并與轉(zhuǎn)化生長因子-β1抗體作對比，評估胎膜在預(yù)防再生神經(jīng)與周圍組織發(fā)生粘連的有效性；同時，為了減少神經(jīng)移植吻合口處瘢痕的形成，我們應(yīng)用胎膜包裹自體神經(jīng)結(jié)合光化學(xué)組織粘合技

5、術(shù)，替代傳統(tǒng)神經(jīng)縫合術(shù)橋接神經(jīng)兩斷端并與自體靜脈血管包裹作對比，評估其預(yù)防神經(jīng)吻合口處瘢痕形成的有效性。而丹參酮ⅡA作為丹參的主要藥理成分，有研究認為其有效成分具有保護神經(jīng)、促進神經(jīng)再生和功能恢復(fù)的作用。我們在大鼠坐骨神經(jīng)橫斷傷模型上分別應(yīng)用兩種不同劑量的丹參酮ⅡA進行腹膜內(nèi)注射，并與甲鈷胺及生理鹽水注射作對比，評估其是否能夠促進神經(jīng)再生和功能恢復(fù)并探尋藥物的合適的劑量。以上實驗術(shù)后應(yīng)用坐骨神經(jīng)功能指數(shù)、神經(jīng)電生理、透視電鏡、免疫組化及

6、熒光金逆行示蹤等技術(shù)，從組織學(xué)和功能學(xué)評價神經(jīng)再生和功能恢復(fù)情況。
　　第一部分胎膜和轉(zhuǎn)化生長因子-β1抗體在大鼠坐骨神經(jīng)修復(fù)中預(yù)防粘連形成的對比研究
　　目的：探討胎膜在周圍神經(jīng)損傷修復(fù)過程中預(yù)防粘連形成的有效性，并與轉(zhuǎn)化生長因子-β1抗體對比，術(shù)后評估神經(jīng)再生和功能恢復(fù)情況。
　　方法：按照Petersen分級標準評估再生神經(jīng)與周圍組織及肌肉筋膜的粘連程度，并應(yīng)用天狼星紅染色、Western-Blot檢測Ⅰ型和Ⅲ型

7、膠原纖維含量。術(shù)后我們通過坐骨神經(jīng)功能指數(shù)、神經(jīng)電生理、透射電鏡及熒光金逆行示蹤等方法，從形態(tài)學(xué)和功能學(xué)上評估胎膜在預(yù)防粘連形成及神經(jīng)再生上的有效性。
　　結(jié)果：本實驗證實與單純自體神經(jīng)移植相比較，局部使用TGB-β1抗體注射或應(yīng)用胎膜包裹自體神經(jīng)，均能有效減少再生神經(jīng)與周圍組織粘連的形成，一定程度上保留了神經(jīng)的活動度，防止粘連形成而導(dǎo)致神經(jīng)表面血管受壓。本實驗表明，胎膜作為一種新的方法能夠有效預(yù)防粘連形成，進一步深入研究將有可能

8、實現(xiàn)在臨床上的應(yīng)用。
　　第二部分光化學(xué)組織粘合技術(shù)在大鼠坐骨神經(jīng)缺損修復(fù)中的應(yīng)用
　　目的：探討胎膜或自體靜脈包裹自體神經(jīng)結(jié)合光化學(xué)組織粘合技術(shù)在周圍神經(jīng)損傷修復(fù)過程中預(yù)防神經(jīng)斷端吻合口處瘢痕的有效性，并與傳統(tǒng)神經(jīng)縫合術(shù)對比，術(shù)后評估神經(jīng)再生和功能恢復(fù)情況。
　　方法：按照Petersen分級標準評估再生神經(jīng)與周圍組織及肌肉筋膜的粘連程度，并應(yīng)用天狼星紅染色、Western-Blot檢測檢測Ⅰ型和Ⅲ型膠原纖維含量。術(shù)

9、后我們通過坐骨神經(jīng)功能指數(shù)、神經(jīng)電生理、透射電鏡及熒光金逆行示蹤等方法，從形態(tài)學(xué)和功能學(xué)兩方面評估胎膜包裹自體神經(jīng)修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)10mm缺損的修復(fù)效果。
　　結(jié)果：我們應(yīng)用胎膜包裹自體神經(jīng)結(jié)合光化學(xué)組織粘合技術(shù)修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)10mm缺損，從形態(tài)學(xué)和功能學(xué)上證實胎膜在修復(fù)效果上要優(yōu)于血管。此外，該技術(shù)可有效減少術(shù)后瘢痕和粘連的形成，結(jié)果明顯優(yōu)于傳統(tǒng)神經(jīng)縫合技術(shù)，隨著研究的深入，在未來將有可能應(yīng)用于臨床中。
　　第三部分丹參

10、酮ⅡA在周圍神經(jīng)損傷修復(fù)中促進神經(jīng)再生的作用研究
　　目的：評價丹參酮ⅡA在周圍神經(jīng)損傷中是否能夠促進神經(jīng)再生，并與甲鈷胺及生理鹽水注射對比，術(shù)后評估神經(jīng)再生和功能恢復(fù)情況。
　　方法：術(shù)后4周，應(yīng)用坐骨神經(jīng)功能指數(shù)、神經(jīng)電生理、透射電鏡及熒光金逆行示蹤等方法，從形態(tài)學(xué)和功能學(xué)兩方面評估不同濃度的丹參酮ⅡA在大鼠坐骨神經(jīng)10mm缺損中的修復(fù)效果。
　　結(jié)果：本實驗證實在大鼠坐骨神經(jīng)橫斷傷后，丹參酮ⅡA能夠有效促進神經(jīng)再