胸腺五肽的聚乙二醇修飾及其表征.pdf

1、聚乙二醇(PEG)修飾技術(shù)可以效地降低蛋白和多肽類藥物的免疫原性和抗原性、延長蛋白和多肽類藥物在體內(nèi)的循環(huán)半衰期、提高蛋白和多肽類藥物在體內(nèi)的綜合藥效，已成功用于改善多種蛋白和多肽類藥物的性質(zhì)。胸腺五肽(TP5)是一種具有重要應(yīng)用價(jià)值的多肽，對(duì)機(jī)體免疫功能具有雙向調(diào)節(jié)作用，能使過強(qiáng)或受到抑制的免疫反應(yīng)趨于正常。本論文探索將mPEG修飾技術(shù)應(yīng)用于TP5，以便解決胸腺五肽臨床應(yīng)用時(shí)存在的理化穩(wěn)定性差、易被蛋白酶水解、在血液中循環(huán)半衰期太短等

2、問題。
　　針對(duì)胸腺五肽的性質(zhì)，采用單甲氧基聚乙二醇-丁醛(mPEG-ButyrALD)和單甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亞胺丙酸酯(mPEG-SPA)兩種不同活性末端的聚乙二醇分別修飾N-末端氨基和第二位的賴氨酸，以反相高效液相(RP-HPLC)檢測(cè)粗產(chǎn)物多肽濃度的方法分析PEG修飾產(chǎn)物的組成，同時(shí)監(jiān)測(cè)不同修飾條件下反應(yīng)動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)指導(dǎo)優(yōu)化修飾工藝條件，以期獲得更高的單修飾產(chǎn)物比例。確定mPEG-ButyrALD5000修飾TP5的優(yōu)選反

3、應(yīng)條件為:反應(yīng)緩沖液pH值為5.0，修飾劑/胸腺五肽摩爾比為2∶1，反應(yīng)時(shí)間55min;mPEG-SPA5000修飾TP5的優(yōu)選反應(yīng)條件為:反應(yīng)緩沖液pH值為8.5，修飾劑/胸腺五肽摩爾比為2.5∶1，反應(yīng)時(shí)間為6min。修飾粗產(chǎn)物用SP-SepharoseFastFlow陽離子交換層析柱分離純化，并超濾除鹽、真空凍干干燥后得到最終產(chǎn)物。
　　對(duì)單修飾產(chǎn)物分子量、體外酶解穩(wěn)定性進(jìn)行了測(cè)定，通過X-射線建立了免疫抑制小鼠模型，并對(duì)T

4、P5、mPEG-ButyrALD-TP5和mPEG-SPA-TP5等溶液對(duì)免疫抑制型小鼠碳廓清能力的影響進(jìn)行了對(duì)比分析。結(jié)果表明，分離純化后mPEG-ButyrALD-TP5和mPEG-SPA-TP5經(jīng)MALDI-TOF-MS法檢測(cè)兩種產(chǎn)物均為單修飾，分子量5600左右;與未修飾TP5相比，其體外酶解穩(wěn)定性得到很好的改善;對(duì)免疫抑制型小鼠，mPEG-ButyrALD-TP5無顯著療效，mPEG-SPA-TP5和TP5均能提高吞噬細(xì)胞的吞