人參皂甙Rd抑制腦缺血炎癥損傷的作用及機(jī)制研究.pdf

1、腦卒中是一種致病機(jī)制復(fù)雜,嚴(yán)重影響人類生存和生活質(zhì)量的災(zāi)難性疾病。盡管目前在治療方面取得部分相關(guān)進(jìn)展,但是研究者對于如何保護(hù)卒中相關(guān)的腦損傷知之甚少。這就導(dǎo)致具有明確神經(jīng)保護(hù)作用,能夠安全運(yùn)用于臨床的藥物少之又少。因此,開發(fā)具有明確保護(hù)作用的藥物對腦卒中治療具有重要的意義。人參和三七是亞洲地區(qū)應(yīng)用廣泛的傳統(tǒng)中草物,悠久的用藥史證實(shí)用藥安全有效。近來研究逐步揭示人參皂甙(ginsenosides,GS)及其有效單體成分GSRb、GSRg、

2、GSRd等具有不同程度的腦損傷保護(hù)作用。其中,我們課題組前期的實(shí)驗(yàn)工作證實(shí),人參皂甙Rd(ginsenosides Rd,GSRd)能夠減輕谷氨酸興奮性毒性損傷,抑制神經(jīng)元胞內(nèi)鈣超載,減少腦缺血后的氧化應(yīng)激損傷,改善線粒體功能方面,具有肯定的神經(jīng)保護(hù)作用。二期和三期的臨床試驗(yàn)同樣表明GSRd治療急性缺血性腦卒中患者安全有效。更為重要的是,我們發(fā)現(xiàn)在腦缺血急性期后應(yīng)用GSRd,仍然能發(fā)揮有效的腦損傷保護(hù)作用;考慮到炎癥反應(yīng)是腦缺血后期重要

3、的病理過程,我們推測GSRd抑制炎癥損傷可能是其發(fā)揮效應(yīng)的重要機(jī)制之一。
　　因此,本課題旨在研究GSRd對實(shí)驗(yàn)性腦缺血后的炎性反應(yīng)的影響及其可能的作用機(jī)制;同時結(jié)合GSRd和皮質(zhì)類固醇的化學(xué)結(jié)構(gòu)十分相似的特點(diǎn),將GSRd和激素類藥物的作用及不良反應(yīng)進(jìn)行比較,為GSRd臨床應(yīng)用于腦卒中治療提供理論依據(jù)。
　　實(shí)驗(yàn)一人參皂甙Rd抑制實(shí)驗(yàn)性腦缺血炎性反應(yīng)的研究
　　目的:探討GSRd對實(shí)驗(yàn)性腦缺血后的炎性反應(yīng)的影響。

4、>　　方法:分別采用大鼠大腦中動脈阻塞再灌注模型、LPS炎性損傷模型和氧糖剝奪模型模擬腦缺血再灌注炎性損傷,以米諾環(huán)素、地塞米松(dexamethasone,DEX)、米非司酮(RU486)作為對照。使用TTC染色測定腦梗死體積,MTT檢測GSRd對炎性損傷神經(jīng)元存活率的影響。使用實(shí)時定量PCR技術(shù)和液相芯片技術(shù)檢測GSRd(10mg/Kg)分別對缺血后炎性細(xì)胞因子mRNA和蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:(1)10mg/Kg GSR

5、d預(yù)先給藥能夠有效減少大鼠缺血后的腦梗死體積,提高受損神經(jīng)元的存活數(shù)量。DEX和RU486對缺血后腦梗死體積不產(chǎn)生影響。
　　(2)GSRd、DEX和米諾環(huán)素預(yù)處理能夠減少多種炎性細(xì)胞因子mRNA和蛋白的表達(dá),從而減輕缺血后的炎性損傷,但三者的抗炎作用沒有顯著性差異。
　　(3)RU486可以阻斷或部分阻斷GSRd和DEX對細(xì)胞因子的抑制作用。
　　結(jié)論:GSRd預(yù)處理能夠保護(hù)腦缺血模型下的神經(jīng)元,這種作用可能與其減輕

6、損傷后的炎性反應(yīng)、抑制細(xì)胞因子表達(dá)密切相關(guān)。
　　實(shí)驗(yàn)二人參皂甙Rd通過作用糖皮質(zhì)激素受體發(fā)揮抗炎效應(yīng)的研究
　　目的:探討GSRd作用糖皮質(zhì)激素受體發(fā)揮抗炎效應(yīng)的作用機(jī)制。
　　方法:OGD損傷后,使用GSRd(10μM)進(jìn)行干預(yù)后,使用qRT-PCR檢測不同干預(yù)處理組NFκB p65 mRNA的表達(dá)。使用 Western Blot檢測糖皮質(zhì)激素受體(glucocorticoid receptor,GR)通路關(guān)鍵蛋白

7、(GR、p-IκBα/IκBα、p-p38/p38、NFκB p65)的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:(1)NFκB是一種調(diào)控炎性細(xì)胞因子表達(dá)的重要轉(zhuǎn)錄因子。GSRd預(yù)處理能夠抑制IκBα磷酸化和NFκB P65入核,從而抑制NFκB活性。
　　(2)p38是維持炎性細(xì)胞因子穩(wěn)定表達(dá)的重要因子。GSRd預(yù)處理能夠抑制p38 MAPK磷酸化,減低p-p38/p38比值,降低p38活性。
　　(3)GR激活可同時調(diào)控其下游的NFκ

8、B和p38分子。GSRd預(yù)處理能夠促進(jìn)GR轉(zhuǎn)位入核,GR抑制劑RU486可以部分阻斷GSRd對缺血后GR通路蛋白表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。
　　結(jié)論:GSRd可抑制炎癥調(diào)控因子NFκB和p38的活性,這種作用可能是與其激活GR密切相關(guān)。
　　實(shí)驗(yàn)三人參皂甙Rd與糖皮質(zhì)激素抗炎效應(yīng)及不良反應(yīng)的對比研究
　　目的:糖皮質(zhì)激素的特點(diǎn)是抗炎作用強(qiáng)大和用藥不良反應(yīng)廣泛。研究對比GSRd與DEX使用后的抗炎效應(yīng)及不良反應(yīng)。
　　方法:

9、分別探討GSRd和DEX對代謝、免疫和骨形成方面的影響。健康C57/B6小鼠分別注射4周10mg/Kg GSRd和2.5mg/Kg DEX,對比不同干預(yù)對小鼠血糖水平,胸腺、脾臟和體重質(zhì)量的改變;采用膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎模型對比GSRd和DEX對關(guān)節(jié)炎癥的作用;觀察不同濃度GSRd(10nM-10μM)和DEX(10nM-10μM)對體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞系MC3T3-E1的增殖和分化影響。
　　結(jié)果:(1)和正常組相比,GSRd組小鼠的血糖

10、、胸腺、脾臟、體重?zé)o明顯變化;相反,DEX組小鼠的血糖升高、胸腺、脾臟和體重質(zhì)量明顯下降(p<0.05)。
　　(2)膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎模型小鼠實(shí)驗(yàn)中,GSRd和DEX均可減輕關(guān)節(jié)炎性細(xì)胞浸潤,兩者之間無顯著差異。
　　(3)在成骨細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中,GSRd和DEX均有促成骨細(xì)胞增殖和成分化的作用,但GSRd的有效劑量范圍較廣(10nM-1μM)。
　　結(jié)論:與DEX相比,GSRd的抗炎作用同樣強(qiáng)大,不會影響血糖、體重和免疫