金蓮花口服液逆向連續(xù)循環(huán)提取工藝及質(zhì)量控制研究.pdf

1、金蓮花口服液現(xiàn)收載于《中國藥典》2010版第二增補(bǔ)本，由金蓮花單味藥材組成，被廣泛應(yīng)用于熱毒內(nèi)盛引起的上呼吸道感染、扁桃體炎、咽炎等癥。在中醫(yī)藥領(lǐng)域，金蓮花具有悠久的藥用歷史，《本草綱目拾遺》中謂其“味苦，性寒，無毒”，可治“口瘡、吼腫、耳疼目痛”?，F(xiàn)代人以先進(jìn)技術(shù)手段以其入藥、代茶，在抗菌消炎、清熱解毒上發(fā)揮了超凡的功效。在抗生素濫用的今天，藥物耐藥性增強(qiáng)，金蓮花口服液有希望作為治療上呼吸道感染、咽炎、扁桃體炎等疾病的主要藥物。

2、>　　金蓮花口服液傳統(tǒng)生產(chǎn)制備過程中，采用立式靜態(tài)提取罐加熱煎煮的方法提取，但生產(chǎn)中該提取方法存在一些問題：
　　1.金蓮花藥材在多次、長時間傳統(tǒng)煎煮過程中，雜質(zhì)（蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)等）浸出多，給口服液制劑后續(xù)的過濾除雜增加負(fù)荷。
　　2.煎煮后的金蓮花藥材爛糊狀，造成濾網(wǎng)堵塞，提取液與藥渣分離困難，需頻繁地更換濾網(wǎng)，使藥液被污染的風(fēng)險加大，此風(fēng)險也是影響液體制劑質(zhì)量的高風(fēng)險點(diǎn)。
　　3.耗費(fèi)大量的提取溶劑，導(dǎo)致后續(xù)蒸發(fā)濃縮

3、時間長，能耗高。
　　當(dāng)前金蓮花口服液質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)為葒草苷含量測定，單一成分含量高低不能說明產(chǎn)品內(nèi)在的質(zhì)量，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有待提高。
　　為提高金蓮花口服液的提取工藝水平，解決工業(yè)生產(chǎn)中的實際問題，和提高金蓮花口服液成品的質(zhì)量控制水平，開展本課題研究。
　　目的：
　　1.對金蓮花口服液的逆向連續(xù)循環(huán)提取工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，并與現(xiàn)行金蓮花口服液制備標(biāo)準(zhǔn)中的提取工藝比較，篩選金蓮花口服液提取最佳工藝。
　　2.采用高

4、效液相色譜法研究并建立金蓮花水提濃縮液中葒草苷和牡荊苷的含量測定方法；用紫外分光光度法建立金蓮花水提濃縮液中總黃酮含量測定方法。
　　3.采用高效液相色譜法建立金蓮花口服液的特征指紋圖譜并同時測葒草苷和牡荊苷含量的方法，并對市售和采用逆向連續(xù)循環(huán)提取中試放大生產(chǎn)的金蓮花口服液產(chǎn)品進(jìn)行相似度評價和質(zhì)量分析。
　　方法：
　　1.以總黃酮、葒草苷、牡荊苷的含量為考察指標(biāo)，以提取溫度、提取時間、藥材粒徑、加水倍數(shù)為實驗因素，

5、每個因素設(shè)計3個水平，采用L18（37）正交試驗法對逆向連續(xù)循環(huán)提取金蓮花口服液的工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)選。以總黃酮含量、葒草苷含量、牡荊苷含量、浸出率、溶劑消耗量、提取時間為指標(biāo)，比較金蓮花口服液采用逆向連續(xù)循環(huán)提取工藝（以下簡稱新工藝）與傳統(tǒng)煎煮工藝的優(yōu)劣。
　　2.采用HPLC色譜法，用Agilent HC-C18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱；甲醇（A）-乙腈(B)-0.1％磷酸水溶液(C)為流動相，按以下梯度洗脫：0～

6、45min(4% A-12% B-84% C)、45～60min(10% A-20% B-70% C)；以349nm為檢測波長；流速1.0mL·min-1；柱溫25℃；進(jìn)樣量5μL的色譜條件，測定金蓮花水提濃縮液中葒草苷和牡荊苷的含量。采用紫外-可見分光光度法，以蘆丁為對照品，通過亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉絡(luò)合顯色，于510nm處用外標(biāo)法測定金蓮花水提濃縮液中總黃酮的含量。
　　3.采用HPLC色譜法，用Phenomenex C1

7、8(4.6×250mm,5μm)色譜柱；A（乙腈）-B（含0.1%磷酸和1%四氫呋喃的溶液）為流動相進(jìn)行梯度洗脫：0min～20min～38min～55min～70min，同時A相為3%～16%～16%～30%～50%；流速：1.0mL·min-1；柱溫25℃；檢測波長230nm；進(jìn)樣量10μL的色譜條件，建立金蓮花口服液指紋圖譜和葒草苷、牡荊苷的含量測定方法。采用國家藥典委員會開發(fā)的《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2004A版》對市售

8、及新工藝中試放大生產(chǎn)的金蓮花口服液進(jìn)行指紋圖譜相似度評價和質(zhì)量分析。
　　結(jié)果：
　　1.金蓮花口服液最優(yōu)提取條件：逆向連續(xù)循環(huán)提取，提取溫度90℃，提取時間2h，藥材粒徑10目，加水倍數(shù)20倍。
　　2.采用HPLC法測定金蓮花水提濃縮液中葒草苷和牡荊苷：葒草苷的線性范圍為18.46～295.37μg·mL-1（r＝0.9999），牡荊苷的線性范圍為5.84～93.44μg·mL-1（r＝0.9999），葒草苷平均回

9、收率96.07%，RSD為0.74%（n＝6），牡荊苷平均回收率97.73%，RSD為1.42%（n＝6）。采用UV-VIS法測定金蓮花水提濃縮液中總黃酮：蘆丁的線性范圍為10.56～63.36μg·mL-1（r=0.9999），總黃酮平均回收率為99.39%，RSD為1.52%（n＝6）。
　　3.建立的金蓮花口服液HPLC指紋圖譜確定了20個共有峰，市售金蓮花口服液指紋圖譜峰相似度均>0.948，新工藝中試放大生產(chǎn)的金蓮花口服

10、液與5個廠家市售產(chǎn)品所生成的對照指紋圖譜比較，相似度均>0.958；葒草苷和牡荊苷的含量測定：葒草苷的線性范圍為10.10～392.80μg·mL-1（r＝0.9999），牡荊苷的線性范圍為2.40～94.90μg·mL-1（r＝0.9999）；葒草苷平均回收率101.85%，RSD為1.61%（n＝6），牡荊苷平均回收率102.53%，RSD為1.45%（n＝6）；市售金蓮花口服液中葒草苷含量和牡荊苷含量分別在1.99～4.63、0.

11、33～1.56mg·mL-1之間，3批新工藝中試放大生產(chǎn)金蓮花口服液中葒草苷含量和牡荊苷含量分別在2.39～2.46、0.57～0.58mg·mL-1之間。
　　結(jié)論：
　　1.逆向連續(xù)循環(huán)提取工藝穩(wěn)定可行，提取溶劑用量少，提取時間短，提取率高；逆向連續(xù)循環(huán)提取工藝生產(chǎn)的金蓮花口服液質(zhì)量與原工藝產(chǎn)品質(zhì)量一致，該提取工藝可作為金蓮花口服液生產(chǎn)工藝的參考。
　　2.高效液相色譜法測定金蓮花水提濃縮液中葒草苷和牡荊苷的含量和