骨髓增生異常綜合征相關(guān)基因表達(dá)研究.pdf

1、目的：研究骨髓增生異常綜合征（myelodysplastic syndromes，MDS）及急性髓細(xì)胞白血病（acute myelogenous leukemia，AML）患者骨髓單個核細(xì)胞中c-FLIPL、c-FLIPS及DLK1基因mRNA表達(dá)情況。通過丙戊酸鈉（sodium valprate，VPA）干預(yù)MDS細(xì)胞株SKM-1，觀察其對細(xì)胞增殖及凋亡的影響，并觀察上述基因在這一過程中表達(dá)變化，分析其作用機制。同時通過相關(guān)檢測加深對

2、SKM-1細(xì)胞株的認(rèn)識。
　　 方法：使用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcrition polymerase chain reaction，RT-PCR）技術(shù)檢測16例MDS患者、8例AML患者及3例正常對照者骨髓單個核細(xì)胞（bone marrowmonomuclear cell，BMMNC）中c-FLIPL、c-FLIPS及DLK1基因mRNA表達(dá)情況；采用四甲基偶氮唑藍(lán)（methyl thiazolyl te

3、trazolium，MTT）比色法檢測VPA對SKM-1細(xì)胞生長的抑制作用；流式細(xì)胞術(shù)（Flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測不同濃度VPA作用后細(xì)胞凋亡率；同時使用RT-PCR技術(shù)檢測VPA作用SKM-1后c-FLIPL，c-FLIPS及DLK1等基因mRNA表達(dá)的變化；采用流式細(xì)胞術(shù)及染色體分析方法檢測SKM-1細(xì)胞株免疫表型及染色體核型。
　　 結(jié)果： DLK1、c-FLIPL mRNA在MDS及AML患者中表達(dá)明顯高

4、于對照組（P<0.05），其在MDS和AML患者之間的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；c-FLIPS mRNA在MDS患者中表達(dá)與對照組相比無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），但MDS-RA患者表達(dá)明顯低于MDS-RAEB及AML患者（P<0.05）；c-FLIPS mRNA在AML患者表達(dá)明顯高于對照組及MDS組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。VPA對于SKM-1細(xì)胞生長具有抑制作用，且具有時間和濃度依賴性；流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯

5、示，細(xì)胞凋亡率隨著VPA濃度的增加而增加；VPA可使SKM-1細(xì)胞中c-FLIPL、c-FLIPS及DLK1基因mRNA表達(dá)明顯降低，且隨著VPA濃度增加逐漸降低（P<0.05）。SKM-1細(xì)胞株免疫表型為CD1599.3％，CD1380％，CD3398.4％，CD11b21％，其余的表型如CD2，CD3，CD5，CD7，CD8，CD10，CD14，CD34，CD64，CD117，HLA-DR均陰性表達(dá)，染色體核型為70-73，XY，-

6、2，2p-，-4，6p+，7q+，+8，9q-，der（10）t（10；21），-12，-15，+18，der（19）t（1；19），-20，+21，+22，+M。
　　 結(jié)論：（1）DLK1、c-FLIPL及c-FLIPS基因在MDS、AML患者骨髓單個核細(xì)胞中表達(dá)存在異常；（2）VPA可以通過促進細(xì)胞凋亡抑制SKM-1細(xì)胞增殖；（3）c-FLIPL、c-FLIPS及DLK1基因表達(dá)的改變可能在VPA誘導(dǎo)SKM-1細(xì)胞凋亡中發(fā)