腸道菌群改變對肝硬化大鼠細菌易位和免疫功能的影響.pdf

1、背景:腸道微生態(tài)在肝硬化感染和血液動力學(xué)并發(fā)癥方面具有十分重要的作用。深入了解腸道微生物群與宿主的相互關(guān)系,尤其是腸道來源細菌易位至腸系膜淋巴結(jié)乃至腸外組織這個重要的事件,具有十分重要的意義。目前還沒有針對腸道微生態(tài)改變導(dǎo)致的肝硬化疾病中細菌易位的系統(tǒng)研究；另外,我們認為在以上肝硬化細菌易位的可能的發(fā)生機制及其治療研究中,局部和全身免疫都起著非常重要的作用。首先,肝硬化患者存在不同程度的免疫功能缺失,具體表現(xiàn)為免疫細胞T、B淋巴細胞數(shù)量

2、或者比例的改變；樹突狀細胞和T淋巴細胞表面標(biāo)志的表達較正常人減少,并且腸道免疫功能也有不同程度的損害；也有可能是因為宿主炎癥細胞因子的大量產(chǎn)生。其次,關(guān)于益生菌治療肝硬化腸道微生態(tài)失衡的研究中,發(fā)現(xiàn)乳酸桿菌和雙岐桿菌等常見的益生菌制劑對機體的免疫系統(tǒng)有調(diào)節(jié)作用。目前針對肝硬化的腸道微生態(tài)改變和局部免疫以及全身免疫的系統(tǒng)研究非常少。從免疫學(xué)角度探討B(tài)T的發(fā)生機制具有重要的意義,也能為臨床運用微生物治療預(yù)防肝硬化病人BT的發(fā)生,減少感染提供

3、理論依據(jù)。
　　 目的:觀察各種改變腸道微生物群的模型對肝硬化大鼠腸道優(yōu)勢菌群的改變和細菌易位的規(guī)律；探討各種腸道微生物群模型致細菌易位的局部和全身免疫功能的變化。初步探討肝硬化大鼠模型中腸道微生物群改變、細菌易位與機體免疫功能三者之間的關(guān)聯(lián)。
　　 方法:
　　 第一部分根據(jù)體重隨機原則先抽取健康對照組,剩余大鼠給予四氯化碳皮下注射和乙醇灌胃聯(lián)合行肝硬化造模；造模成功后,將肝硬化大鼠隨機分為6組,分別給與生理鹽

4、水、大腸桿菌、鼠傷寒沙門菌、腸球菌組、雙歧桿菌以及諾氟沙星(40mg/kg)灌胃7天后,大鼠禁食12小時后無菌操作收集標(biāo)本:肝、脾、腸系膜淋巴結(jié)、腹水、血細菌易位分析；選用標(biāo)準培養(yǎng)方法培養(yǎng)主要腸道菌群進行數(shù)量分析；肝功能檢測,鱟試劑檢測試劑盒檢測血漿內(nèi)毒素,易位細菌的細菌鑒定。
　　 第二部分大鼠分組同第一部分。收集PPs、MLN、脾臟淋巴細胞,進行CD4+和CD8+T細胞、CD45RA+B細胞流式分析；ELISA法檢測血清細胞

5、因子IL-1β、IL-6、IL-10和INF-a；IgG和IgA。
　　 結(jié)果:
　　 第一部分與肝硬化對照組相比,灌服鼠傷寒沙門菌組ALT、AST水平增高(P<0.001),大腸桿菌組和腸球菌組AST水平增高(P<0.001)?；啬c末端菌群分析結(jié)果:鼠傷寒沙門菌組腸桿菌計數(shù)增多(p<0.05),乳酸桿菌、雙岐桿菌以及總厭氧菌計數(shù)顯著減少(P<0.001)；雙歧桿菌組腸桿菌計數(shù)顯著減少(P<0.001),乳酸桿菌和雙岐桿

6、菌計數(shù)增多(P<0.05)；諾氟沙星組腸桿菌計數(shù)減少(P<0.05),各實驗組細菌易位發(fā)生率無統(tǒng)計學(xué)差異。易位細菌鑒定結(jié)果:1)各組腸系膜淋巴結(jié)有單個細菌易位也有多個細菌易位；2)在同一只大鼠,易位至腸系膜淋巴結(jié)、腹水以及血的易位細菌可不一致；3)鼠傷寒沙門菌組MLN易位細菌可分離到草綠色鏈球菌和銅綠假單胞菌；4)抗生素組MLN易位細菌以革蘭陽性球菌為主；5)腸球菌易位細菌以革蘭陰性桿菌為主。
　　 第二部分與肝硬化對照組相比,

7、鼠傷寒沙門菌組血清IL-6、IL-10濃度增加(P<0.001),大腸桿菌組血清IL-1β、IL.10濃度增加(P<0.001),腸球菌組IL-1β、IL-6濃度增加(P<0.001)；鼠傷寒沙門菌組血清IgG的濃度增加,血清IgA的濃度減少(P<0.001)；MLN的CD45RA+B細胞的百分比減少(P<0.05),大腸桿菌組、雙歧桿菌組和諾氟沙星組的腸道PPs結(jié)的CD45RA+B細胞的百分比均減少(P<0.001)。雙歧桿菌組和諾氟

8、沙星組的脾臟和PPs的CD4+T和CD8+T細胞百分比增加(P<0.05)。鼠傷寒沙門菌組PPs的CD4+T和CD8+T細胞百分比顯著減少(P<0.001)。
　　 結(jié)論:
　　 不同的腸道菌群改變能夠預(yù)防或加劇肝硬化大鼠肝損傷和細菌易位；腸道菌群的改變、腸道屏障損傷、內(nèi)毒素血癥三者相互作用可影響到細菌易位和肝功能。
　　 腸道菌群改變能夠影響肝硬化大鼠的腸道局部和全身免疫。改變的腸道菌群能夠影響炎癥細胞因子的釋