紫花牡荊素誘導(dǎo)結(jié)腸癌干細(xì)胞樣細(xì)胞凋亡作用的研究.pdf

1、目的：
　　研究多甲氧基黃酮即紫花牡荊素(casticin，CAS)誘導(dǎo)源自人結(jié)腸癌 HCT116細(xì)胞系腫瘤球形成細(xì)胞即結(jié)腸癌干細(xì)胞樣細(xì)胞(colon cancer stem cell like cells, CCSLCs)凋亡作用。探討CAS誘導(dǎo)CCSLCs凋亡是否涉及其降低細(xì)胞Akt蛋白磷酸化水平作用。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)人結(jié)腸癌 HCT-116細(xì)胞，干細(xì)胞條件培養(yǎng)基成球培養(yǎng)法分離和富集CCSLCs為受試對(duì)象

2、。采用腫瘤球形成法檢測(cè)不同濃度CAS對(duì)CCSLCs自我更新的影響。碘化丙啶(propidium iodide, PI)染色流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry, FCM)定量分析CAS對(duì)CCSLCs細(xì)胞凋亡率的影響。DNA瓊脂糖凝膠電泳觀察CAS對(duì)CCSLCs細(xì)胞 DNA核小體間斷裂的影響。熒光標(biāo)記 CD133抗體 FCM分析CAS對(duì)CCSLCs干細(xì)胞標(biāo)志物CD133表達(dá)的影響。最后，采用Western Blot分析CAS對(duì)CCSL

3、Cs細(xì)胞Akt蛋白磷酸化水平的影響。
　　結(jié)果：
　　體外培養(yǎng)和擴(kuò)增人結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞系細(xì)胞，采用干細(xì)胞條件培養(yǎng)基懸浮培養(yǎng)10天，細(xì)胞呈典型非粘附三維結(jié)腸癌腫瘤球體生長(zhǎng)。腫瘤球形成法檢測(cè)結(jié)果顯示，在5.0～10.0μM濃度范圍內(nèi)，CAS以濃度依賴方式減少CCSLCs的腫瘤球數(shù)目(P＜0.05)。PI染色FCM分析結(jié)果表明CAS(5.0和10.0μM)增加CCSLCs凋亡率，呈濃度依賴趨勢(shì)(P＜0.05)。CAS(5.0

4、和10.0μM)處理CCSLCs24小時(shí)， DNA瓊脂糖凝膠電泳呈現(xiàn)核小體間DNA斷裂的梯形條帶圖譜。熒光標(biāo)記CD133 抗體FCM分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)CAS以濃度依賴方式降低干細(xì)胞標(biāo)志蛋白CD133表達(dá)(P＜0.05)。Western Blot檢測(cè)提示 CAS抑制CCSLCs細(xì)胞Akt蛋白磷酸化，成濃度依賴性(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1. CAS具有抑制CCSLCs自我更新及誘導(dǎo)CCSLCs凋亡作用。