骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞的誘導(dǎo)分化及心肌梗死治療的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymalstemcells，MSCs)是造血基質(zhì)細(xì)胞的祖先細(xì)胞，在特定條件下可向成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、肌腱、脂肪細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞及神經(jīng)細(xì)胞樣細(xì)胞分化，且易于獲得及擴(kuò)增，是細(xì)胞替代治療和組織工程研究中常用的種子細(xì)胞。本研究從大鼠骨髓中分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，初步探討其向心肌細(xì)胞定向分化機(jī)制以及移植治療心肌梗死的可行性，為進(jìn)一步臨床研究和運(yùn)用奠定基礎(chǔ)。 方法：(1)分離大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(

2、bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs)，通過常規(guī)培養(yǎng)，在體外觀察其生長特性、抗原表達(dá)等特征；(2)分離培養(yǎng)新生大鼠的心肌細(xì)胞，觀察其在體外培養(yǎng)的生長特性、特異性抗原表達(dá)等特征：(3)體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞定向分化并采用免疫熒光、RT—PCR等方法對誘導(dǎo)后細(xì)胞進(jìn)行鑒定：(4)建立大鼠心肌梗死模型并以心電圖、心臟超聲和血心肌酶譜鑒定；(5)運(yùn)用誘導(dǎo)前后的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療大鼠心肌梗死模型

3、，并以心功能相關(guān)指標(biāo)評價(jià)療效。 結(jié)果：(1)由骨髓分離培養(yǎng)得到的間充質(zhì)干細(xì)胞呈梭形貼壁生長，生長迅速，可大量繁殖。運(yùn)用免疫熒光和流式細(xì)胞儀檢測顯示該群細(xì)胞高表達(dá)CD54(ICAM．1)、CD90(thy．1)分子，其中一小部分細(xì)胞亞群表達(dá)CD45分子。(2)由新生大鼠心肌組織分離培養(yǎng)得到心肌細(xì)胞呈簇樣生長并重疊成致密有邊界的細(xì)胞團(tuán)，并出現(xiàn)節(jié)律性收縮，經(jīng)免疫熒光檢測表達(dá)心肌細(xì)胞特異的MHC(myosinheavychain)、de

4、smin和connexin分子。(3)經(jīng)5umol／L和lOumol／L5-aza誘導(dǎo)后的間充質(zhì)干細(xì)胞表面均可檢測到MHC、connexin和desmin分子，其中10umol／L5-aza誘導(dǎo)后的心肌樣細(xì)胞表達(dá)較強(qiáng)；經(jīng)20girl和1.00g/L復(fù)方香丹注射液誘導(dǎo)的心肌樣細(xì)胞均可表達(dá)MHC、connexin和desmin分子，尤以20g／L濃度組表達(dá)較強(qiáng)，陽性率可達(dá)95％左右，且細(xì)胞生長狀態(tài)良好，當(dāng)香丹濃度達(dá)到250g幾以上時(shí)，細(xì)胞形

5、態(tài)開始不規(guī)則，邊界不清。(4)心肌梗死模型建立后心電圖ST段抬高，超聲心動圖可見明顯的心梗區(qū)域，心梗后24小時(shí)血心肌酶譜測定顯示CKMB、LDH也顯著升高。(5)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理顯示，伴隨復(fù)方香丹注射液的MSCs注射至心肌梗死部位周邊組織后，心梗大鼠心功能較對照組有所改善。結(jié)論：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有向心肌細(xì)胞分化的潛質(zhì)，且取材方便，自體應(yīng)用時(shí)無免疫排斥性，是一種良好的心肌修復(fù)種子細(xì)胞。運(yùn)用結(jié)扎冠狀動脈法可建立大鼠心肌梗死模型，且各項(xiàng)指標(biāo)接近于