銀杏葉對(duì)大鼠腦缺血再灌注后急性肺損傷的保護(hù)作用及機(jī)制探討.pdf

1、目的：探討銀杏葉提取物對(duì)腦缺血-再灌注(CIRI,以下簡(jiǎn)稱 I/R)后急性肺損傷保護(hù)作用的機(jī)制，尋找出治療腦缺血-再灌注后所致肺組織損傷以及全身組織損傷和臟器損傷比較有效的中藥，為臨床用藥提供理論依據(jù)，為拓展中醫(yī)藥在防治缺血性腦血管疾病的領(lǐng)域提供理論和實(shí)驗(yàn)參考。
　　方法：36只SD大鼠隨機(jī)等分為假手術(shù)(S)組、缺血-再灌注(I/R)組、銀杏葉提取物+缺血/再灌注(EGB+I/R)組。測(cè)量大鼠單側(cè)腦缺血90min再灌注24h后肺組

2、織濕/干比，電鏡觀察肺組織損傷情況，肺組織勻漿后測(cè)定髓過(guò)氧化物酶（MPO）活性、丙二醛（MDA）含量以及非對(duì)稱性二甲基精氨酸(ADMA)含量，對(duì)肺泡灌洗液（BALF）進(jìn)行中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)，ADMA含量分析，對(duì)出入肺血進(jìn)行ADMA含量檢測(cè)。通過(guò) western blot及RT-PCR方法檢測(cè)肺大鼠蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶(PRMT)和二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH)蛋白及mRNA的表達(dá)，探討缺血再灌注后急性肺損傷與非對(duì)稱性二甲基精氨酸/二甲

3、基精氨酸二甲胺水解酶(ADMA/DDAH)機(jī)制的關(guān)系。
　　結(jié)果：(1)I/R組的濕/干比增大,與 S組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;EGB+I/R組濕/干比較I/R組減少，與I/R組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）; EGB+I/R組較S組有所增加，但與S組比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。(2)I/R組MPO活性和MDA含量增加,與S組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;EGB+I/R組MPO活性和MDA含量較I/R組減少

4、，與I/R比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）; EGB+I/R組與S組比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。(3)I/R組NO和NOS含量有所增加,但與S組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;EGB+I/R組NO和NOS含量較 I/R組減少，與I/R比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。(4)電鏡下S組肺組織結(jié)構(gòu)完整，支氣管及肺泡腔完整性好，無(wú)充血及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，紋理清晰，色澤正常。I/R組肺組織毛細(xì)血管充血，肺泡間隔炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡腔內(nèi)大量炎

5、性細(xì)胞滲出、出血及炎性滲液積聚，部分肺泡壁破裂、融合，肺泡壁增厚;EGB+I/R組肺組織毛細(xì)血管充血及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)現(xiàn)象不明顯，較I/R組炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和組織損傷現(xiàn)象明顯減輕。(5)I/R組的肺泡灌洗液中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)有所增加,與 S組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;而 EGB+I/R組肺泡灌洗液中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)較 I/R組減少，與 I/R比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）; EGB+I/R組與S組比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。(6)肺泡

6、灌洗液、外周血和入肺血中I/R組的ADMA含量顯著增加,與S組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;而EGB+I/R組肺泡灌洗液和入肺血中ADMA含量較I/R組減少，與I/R比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）; EGB+I/R組與S組比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。出肺血中I/R組的ADMA含量顯著減少,與S組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;而EGB+I/R組出肺血中的ADMA含量較I/R組減少，與I/R比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）

7、;EGB+I/R組較S組有所增加，但與S組比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。(7)肺組織中PRMT蛋白在缺血再灌注后表達(dá)增強(qiáng)，DDAH蛋白在缺血再灌注后表達(dá)降低，I/R組與S組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），再灌注后PMRT蛋白明顯增高，與EGB+I/R組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；PRMT mRNA水平在缺血再灌注后表達(dá)增強(qiáng)，DDAH mRNA水平在缺血再灌注后表達(dá)降低，與S組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），再灌注后PMR

8、T mRNA水平增高，與EGB+I/R組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。EGB+I/R組PRMT蛋白在缺血再灌注后與I/R組比較有所降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），DDAH蛋白在缺血再灌注后表達(dá)與I/R組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。蛋白表達(dá)變化與mRNA變化相一致。
　　結(jié)論：(1)銀杏葉提取物可以降低大鼠腦缺血再灌注后肺組織的干濕比，減輕肺水腫，保護(hù)肺組織。(2)銀杏葉提取物可以降低大鼠腦缺血再灌注損傷后肺組織MDA

9、含量，抑制MPO活性，抑制NO及NOS過(guò)量表達(dá)，減少氧化應(yīng)激損害，抑制自由基的生成，從而起到保護(hù)肺組織的作用。(3)銀杏葉提取物可以減輕大鼠腦缺血再灌注后肺組織的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，減輕肺組織炎癥反應(yīng)，有利于受損肺組織的自身修復(fù)。(4)銀杏葉提取物可以降低腦缺血再灌注后急性肺損傷大鼠肺泡灌洗液、外周血、入肺血的ADMA含量，從而減輕了ADMA對(duì)肺組織和肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的損害，一定程度上抑制了氧化應(yīng)激損害，減輕了自由基的攻擊程度，發(fā)揮了肺保護(hù)作

10、用。(5)ADMA及DDAH的消長(zhǎng)變化對(duì)大鼠腦缺血再灌注后肺損傷的損害和保護(hù)作用具有重要意義，ADMA/DDAH通道可能對(duì)大鼠腦缺血再灌注所致肺組織炎性損傷有保護(hù)作用,對(duì)大鼠腦缺血再灌注后肺組織氧化應(yīng)激損傷有一定改善作用,其機(jī)制可能與 ADMA/DDAH通道的活化有關(guān)。(6)銀杏葉提取物對(duì)大鼠腦缺血再灌注肺損傷的保護(hù)作用來(lái)源于其益氣活血作用，這種祛瘀與扶正相結(jié)合的方法可以推廣到大鼠腦缺血再灌注其他臟器損傷的治療上，從而可以最大程度的發(fā)揮