胃癌檢測(cè)血漿miRNA分子標(biāo)志物研究.pdf

1、目的:胃癌是世界上死亡率最高的惡性腫瘤之一,東亞地區(qū)是其主要高發(fā)地區(qū)。大量的研究已經(jīng)證實(shí)在不同類型癌癥患者的血漿中可以檢測(cè)到特異性的miRNA分子,血漿miRNA分子有望成為腫瘤檢測(cè)的標(biāo)志物分子。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA)近來被廣泛關(guān)注,lncRNA在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的重要作用也已被廣泛認(rèn)可。本研究通過篩選、鑒定獲得胃癌患者血漿miRNA候選標(biāo)志物分子,并探討其做為胃癌腫瘤檢測(cè)標(biāo)志物的可行性;開展胃癌差異表達(dá)長(zhǎng)鏈非編碼RNA篩選

2、鑒定,為獲得胃癌檢測(cè)長(zhǎng)鏈非編碼RNA標(biāo)志物研究奠定基礎(chǔ);同時(shí)建立檢測(cè)miRNA分子新方法。
　　方法:1)取24例胃腺癌血漿樣本和24例非腫瘤血漿樣本分別進(jìn)行混合,針對(duì)135個(gè)候選miRNA分子,通過實(shí)時(shí)定量PCR的方法檢測(cè)并獲得候選miRNA。在驗(yàn)證階段,用188例獨(dú)立的血漿樣本(99例胃癌,89例對(duì)照)進(jìn)行檢測(cè)分析miRNA。
　　2)取2組胃腺癌組織和癌旁組織,利用Arraystar Human LncRNA芯片檢測(cè)胃

3、癌組織中l(wèi)ncRNA相對(duì)表達(dá)水平。選取差異表達(dá)的lncRNA,對(duì)47例胃腺癌組織及癌旁組織和6種胃癌細(xì)胞系進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)分析。
　　3)采用poly(U)聚合酶在miRNA 3′末端添加U尾,反轉(zhuǎn)錄為cDNA,實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)miRNA。
　　結(jié)果:1)在混合血漿中對(duì)135個(gè)miRNA進(jìn)行檢測(cè),獲得了候選miRNA。進(jìn)一步驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)miR-378、miR-379、miR-485-3p、miR-885-5p、let-7

4、a、let-7f在胃癌患者組血漿中的表達(dá)量相對(duì)于對(duì)照組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)合臨床資料對(duì)上述6個(gè)miRNA進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)其對(duì)胃癌檢測(cè)胃癌分期等的預(yù)判有輔助價(jià)值。
　　2)Arraystar Human LncRNA芯片檢測(cè)結(jié)果提示胃癌組織與癌旁組織表達(dá)譜存在差異,采用實(shí)時(shí)定量PCR分析獲得了5種lncRNA:AK001058、AL359062、NR_015379、uc002.the和AK025209在47例胃癌組織和癌旁組織中,以

5、及在6種胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)譜。
　　3)經(jīng)poly(U)聚合酶加尾的RT-PCR方法可以成功有效的檢測(cè)miRNA分子。
　　結(jié)論:本研究獲得了胃癌檢測(cè)的候選miRNA標(biāo)志物分子,具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。初步了解lncRNA與胃癌之間的關(guān)系,并構(gòu)建了lncRNA的表達(dá)載體。本研究建立的poly(U)加尾RT-PCR方法可有效地檢測(cè)分析miRNA分子,具有特異性強(qiáng),靈敏度高的特點(diǎn),為miRNA的檢測(cè)分析及功能機(jī)制研究提供了一種新