蘋果品種及砧木高效脫毒技術(shù)體系的建立.pdf

1、蘋果莖溝病毒(ASGV)、蘋果褪綠葉斑病毒(ACLSV)、蘋果莖痘病毒(ASPV)和蘋果銹果類病毒(ASSVd)是蘋果果樹上4種重要病毒,廣泛分布于世界各蘋果產(chǎn)區(qū),導(dǎo)致果樹生長勢和果實(shí)的產(chǎn)量及品質(zhì)明顯下降,至今沒有高效的防治方法,進(jìn)行無病毒苗木的繁育是目前唯一的有效措施。傳統(tǒng)的主要脫毒方法是恒溫?zé)崽幚?該方法的脫毒效率較低,獲得的脫毒品種有限,為改進(jìn)傳統(tǒng)的脫毒方法,提高脫毒率,本試驗(yàn)以煙臺地區(qū)主栽蘋果品種和砧木為試材,分別采用熱處理+莖

2、尖培養(yǎng)、化學(xué)處理+莖尖培養(yǎng)以及超低溫處理+莖尖培養(yǎng)的方法對其進(jìn)行脫毒處理,以 RT-PCR技術(shù)為檢測手段,對3種處理方法的脫毒效果作出評價(jià),從而建立針對不同品種和砧木的高效脫毒技術(shù)體系。主要結(jié)果如下:
　　1.通過對不同品種和砧木進(jìn)行初代培養(yǎng),建立其無菌體系,探究了 Hgcl2消毒時(shí)間對植株成活率的影響,確定了2001、紅將軍和煙富10號的Hgcl2最佳消毒時(shí)間為11min,其成活率在68％以上;煙砧1號、煙砧2號和煙砧3號的消毒

3、時(shí)間為12 min,成活率在70%以上;煙富8號的消毒時(shí)間為10 min,成活率達(dá)90%;煙富6號的Hgcl2最佳消毒時(shí)間是13 min,成活率為75%。
　　2.獲得了不同品種和砧木的莖尖培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方。適于2001、紅將軍、煙富8號、煙富10號和煙富6號的莖尖培養(yǎng)基配方是MS+6-BA2.5mg/L+IBA0.5 mg/L+5.3 g/L瓊脂+30 g/L蔗糖,pH5.8;適于煙砧1號、煙砧2號和煙砧3號

4、的莖尖培養(yǎng)基是MS+6-BA2.0 mg/L+IBA0.4 mg/L+5.3 g/L瓊脂+30 g/L蔗糖,pH5.8;離體植株繼代培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為MS+6-BA0.5 mg/L+IBA0.1 mg/L+5.3 g/L瓊脂+30 g/L蔗糖,pH5.8;生根培養(yǎng)基為1/2MS+IAA1.5 mg/L+IBA0.15 mg/L+5.3 g/L瓊脂+20 g/L蔗糖,pH5.8。
　　3.通過對盆栽苗和試管苗進(jìn)行變溫?zé)崽幚?發(fā)現(xiàn)不同

5、品種和砧木對高溫忍耐性不同,2001盆栽苗和試管苗的極限天數(shù)均大于60天,紅將軍、煙富8號和煙富10號的極限天數(shù)為60天,煙富6號和煙砧3號的極限天數(shù)是50天,煙砧2號是40天,而煙砧1號耐熱性最差,極限天數(shù)僅為30天。
　　4.經(jīng)熱處理+莖尖培養(yǎng)、化學(xué)處理+莖尖培養(yǎng)以及超低溫處理+莖尖培養(yǎng)方法處理后,除煙富6號和煙砧1號的分化率都低于10%,其余品種和砧木的莖尖成活率和分化率均較高。
　　5.通過比較分析不同處理的脫毒效果

6、,結(jié)果表明,變溫?zé)崽幚韺CLSV的脫除率最高可達(dá)83.33%,化學(xué)處理ASGV和ASPV的脫除率均達(dá)到100%,超低溫處理后ASSVd的脫除率最高可達(dá)75.61%。結(jié)合不同品種/砧木的不同病毒的脫毒率,為其搭配最佳處理組合。2001盆栽苗,變溫?zé)崽幚?0 d(ACLSV)+化學(xué)處理60 d(ASGV、ASPV)+超低溫處理(ASSVd);紅將軍盆栽苗,變溫?zé)崽幚?0 d(ACLSV)+化學(xué)處理60 d(ASGV、ASPV)+超低溫處理

7、(ASSVd);煙富8號盆栽苗,變溫?zé)崽幚?0 d(ACLSV、ASPV)+化學(xué)處理60 d(ASGV)+超低溫處理(ASSVd);煙富10號盆栽苗,變溫?zé)崽幚?0 d(ACLSV)+化學(xué)處理60 d(ASGV、ASPV)+超低溫處理(ASSVd);2001試管苗,變溫?zé)崽幚?0 d(ACLSV)+化學(xué)處理60 d(ASGV、ASPV)+超低溫處理(ASSVd);煙砧2號試管苗,變溫?zé)崽幚?0 d(ACLSV)+化學(xué)處理60 d(ASG