肝X受體通過調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激通路抑制由缺氧-復氧誘導的H9c2心肌細胞凋亡.pdf

1、目的：⑴以H9c2細胞（大鼠心肌樣細胞）為研究對象，體外水平構(gòu)建缺氧復氧損傷模型，模擬心臟的缺血再灌注損傷。⑵觀察肝X受體激動劑T0901317預處理后心肌缺氧復氧損傷中細胞活性及凋亡水平的改變，并測定內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激水平相關(guān)指標的變化。初步闡明肝X受體在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激水平對H9c2心肌細胞凋亡等過程中的作用。
　　方法：①體外培養(yǎng)大鼠H9c2心肌細胞，進行缺氧3h復氧10h，復制缺氧復氧模型。②將H9c2心肌細胞隨機分為3組，正常對照組（

2、Control組）、缺氧/復氧組(H/R)、T0901317（10μmol/L）預處理+缺氧/復氧組。③CCK-8法檢測各組細胞存活率，Hoechst33342/PI雙染和Annexin V-FITC流式細胞儀技術(shù)檢測各組細胞凋亡情況。④qRT-PCR和Western blot檢測胞內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激水平蛋白GRP78，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激凋亡蛋白CHOP/GADD153、Caspase-12基因和蛋白表達情況。
　　結(jié)果：⑴與Control組相

3、比，H/R組和T0901317預處理組細胞存活率均明顯減低(P＜0.01)，但T0901317預處理組的細胞存活率較H/R組有所改善，細胞存活率較H/R組明顯增高(P＜0.01)。⑵Hoechst33342/PI雙染和Annexin V-FITC流式細胞儀技術(shù)檢測計算各組H9c2細胞凋亡率，與Control組相比，H/R組和T0901317預處理組細胞凋亡率明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，但T0901317預處理組較H/R組

4、相比，凋亡率明顯降低（P＜0.01）。⑶H/R組和T0901317預處理組H9c2心肌細胞內(nèi)GRP78、CHOP/GADD153、Caspase-12的mRNA及蛋白表達水平較Control組均明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01);而與H/R組相比，T0901317預處理組GRP78、CHOP/GADD153、Caspase-12的mRNA及蛋白表達情況較單純H/R組組明顯下調(diào)，數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。
　　結(jié)