生物酶法制備真菌菌絲體多糖的工藝優(yōu)化及生物活性研究.pdf

1、本文將9種酶提取真姬菇、齒耳菌和乳牛肝菌菌絲體多糖的效果進(jìn)行了比較；并首次利用均勻設(shè)計(jì)優(yōu)化了真姬菇菌絲體多糖的提取條件；對(duì)獲得的真姬菇、齒耳菌菌絲體多糖進(jìn)行了抗腫瘤和抗氧化活性的檢測(cè)；同時(shí)比較了真姬菇胞壁多糖和胞內(nèi)多糖的生物活性。
　　溶壁酶是提取3種真菌菌絲體多糖產(chǎn)量最高的酶類，其多糖產(chǎn)量分別是14.78±0.22 mg/g干菌絲、16.66±1.60 mg/g干菌絲、27.49±1.89 mg/g干菌絲，比對(duì)照提高了164.3

2、6％、156.68%、141.19%。在真姬菇和乳牛肝菌菌絲體多糖的提取中，中性蛋白酶A是最經(jīng)濟(jì)適合的酶類，其多糖產(chǎn)量分別為8.52±0.27 mg/g干菌絲、20.67±1.86 mg/g干菌絲，比對(duì)照提高了56.48%、44.85%；而在齒耳菌菌絲體多糖的提取中，中性蛋白酶A的多糖產(chǎn)量是7.39±0.16 mg/g干菌絲，比對(duì)照提高了13.86%，但與對(duì)照產(chǎn)量無差異顯著性（p>0.05）。
　　通過單因素實(shí)驗(yàn)獲得了中性蛋白酶A

3、酶解制備真姬菇菌絲體多糖的適宜酶用量、酶解時(shí)間、酶解溫度、提取時(shí)間、提取溫度和提取次數(shù)；采用均勻設(shè)計(jì)方法獲得了中性蛋白酶A制備菌絲體多糖的最佳條件為：在2%酶用量下，43.05℃酶解4h，100℃提取1h，提取1次。該優(yōu)化條件下多糖產(chǎn)量的預(yù)測(cè)值為16.65 mg/g干菌絲，驗(yàn)證實(shí)測(cè)值為15.73±0.15 mg/g干菌絲，優(yōu)化條件下獲得的多糖產(chǎn)量比優(yōu)化前的產(chǎn)量提高75.0%，比熱水提取法和微波輔助提取法分別提高122.5%和104.8%

4、，表明酶解法是簡(jiǎn)便易行的高產(chǎn)制備真姬菇菌絲體多糖的方法。
　　利用MTT法檢測(cè)了真姬菇菌絲體多糖的抗腫瘤活性。果膠酶、酸性蛋白酶、纖維素酶A提取的菌絲體多糖對(duì)癌細(xì)胞（SGC7901）的抑制率顯著高于其它酶及對(duì)照提取的多糖（p<0.05），其IC50分別是0.343 mg/mL、0.397 mg/mL、0.430 mg/mL。中性蛋白酶A提取的多糖的抗腫瘤活性的IC50是0.984 mg/mL。真姬菇胞壁多糖和胞內(nèi)多糖的抗腫瘤活性試

5、驗(yàn)表明，發(fā)揮抗腫瘤作用的多糖主要位于菌絲體胞內(nèi)。
　　不同酶類提取的齒耳菌菌絲體多糖的抗腫瘤活性試驗(yàn)表明，纖維素酶B提取的多糖的活性顯著高于其他酶類提取的多糖（p<0.05），其抗腫瘤活性的IC50為0.863 mg/mL。
　　抗氧化活性試驗(yàn)中，木瓜蛋白酶、果膠酶、中性蛋白酶A和B提取的真姬菇菌絲體多糖的抗氧化活性較高，他們的羥基自由基清除能力的EC50分別是51.98μg/mL、55.76μg/mL、63.56μg/mL

6、、62.49μg/mL；超氧陰離子自由基清除能力的EC50分別是153.77μg/mL、195.61μg/mL、252.68μg/mL、219.85μg/mL。酶類對(duì)真姬菇胞壁多糖的抗氧化活性無影響。多糖的抗氧化活性成分主要存在于菌絲體胞內(nèi)。
　　木瓜蛋白酶提取的齒耳菌菌絲體多糖的總抗氧化能力，清除羥基自由基能力，超氧陰離子自由基清除能力均比其他酶提取的多糖高（p<0.05），其羥基自由基清除能力、超氧陰離子自由基清除能力的EC5