除草放線菌的篩選及其培養(yǎng)條件的研究.pdf

1、放線菌作為大多數(shù)抗生素和一些活性物質(zhì)的產(chǎn)生菌，也是開發(fā)天然除草活性物質(zhì)的重要來(lái)源。因此本研究的主要目的是通過(guò)除草劑生測(cè)方法篩選出具有除草活性的菌株，并對(duì)除草活性菌株的生長(zhǎng)代謝、穩(wěn)定性、鑒定及培養(yǎng)條件4個(gè)方面進(jìn)行了初步的研究。 從沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)標(biāo)本園、植物園、試驗(yàn)田及鐵嶺市農(nóng)科院試驗(yàn)田等地土壤樣本中分離出114株放線菌，通過(guò)蛋白核小球藻生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)和培養(yǎng)皿法雜草生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)兩套篩子初篩，篩選出一株具有較強(qiáng)除草活性的菌株W10，該菌株

2、對(duì)稗草的萌發(fā)抑制率，芽長(zhǎng)抑制率和根長(zhǎng)抑制率，分別為13.37％，41.91％和97.96％。結(jié)果表明該菌株對(duì)稗草的抑制作用主要表現(xiàn)為抑制根部生長(zhǎng)。 通過(guò)植物生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)和溫室盆栽雜革生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)，對(duì)初篩菌株W10的除草活性進(jìn)行了進(jìn)一步的驗(yàn)證，首先進(jìn)行對(duì)毒素敏感的植物的生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)，W10菌株對(duì)4種生物學(xué)特性不同的單、雙子葉植物表現(xiàn)出不同的抑制效果，這說(shuō)明W10菌株的生物除草活性對(duì)高等植物具有一定的生理選擇性；溫室盆栽試驗(yàn)結(jié)果表明

3、發(fā)酵上清液對(duì)水1∶1稀釋時(shí)，對(duì)稗草的抑制效果較顯著，萌發(fā)抑制率和根長(zhǎng)的抑制均達(dá)到了50％以上，但對(duì)根的抑制率比培養(yǎng)皿法有所下降；1∶30稀釋時(shí)對(duì)稗草抑制效果大幅下降，這說(shuō)明除草活性物質(zhì)對(duì)土壤復(fù)雜的環(huán)境因素比較敏感，而且按目前的發(fā)酵液配方和發(fā)酵條件對(duì)W10菌株進(jìn)行發(fā)酵，所得發(fā)酵液中的除草活性物質(zhì)含量很低，難以滿足防治田間稗草的要求。 對(duì)除草活性菌株W10的生長(zhǎng)代謝研究表明，菌株活性最高時(shí)正處在菌體生長(zhǎng)的衰亡期，這說(shuō)明除草活性物質(zhì)主

4、要是菌體的次級(jí)代謝產(chǎn)物，收獲有效活性產(chǎn)物的時(shí)間應(yīng)該在衰亡期即96h-108h。 對(duì)W10菌株的穩(wěn)定性研究表明：菌株具有很好的傳代穩(wěn)定性，從菌體的培養(yǎng)特征及發(fā)酵液除草活性變化來(lái)考察菌株連續(xù)培養(yǎng)10代的傳代穩(wěn)定性，各代菌株仍表現(xiàn)與出發(fā)菌株相似的特征特性；菌株發(fā)酵液的熱穩(wěn)定性較差，80℃以上處理30min活性明顯下降，110℃以上處理30min活性完全喪失；菌株發(fā)酵液的酸、堿穩(wěn)定性較好，在酸性條件pH=3及堿性條件pH=10下處理，其

5、除草活性與未經(jīng)處理的發(fā)酵液相比均沒有明顯變化。 根據(jù)W10菌株的形態(tài)特征、培養(yǎng)特征以及生理生化特性對(duì)菌株分類地位進(jìn)行了初步的鑒定，鑒定結(jié)果為：W10菌株為鏈霉菌屬的灰色鏈霉菌的一個(gè)變種。 對(duì)W10菌株發(fā)酵培養(yǎng)基配方和發(fā)酵條件進(jìn)行正交試驗(yàn)，結(jié)果表明：W10菌株的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：丙三醇5.0％、酵母膏4.0％、(NH4)2SO41.0％、K2HPO40.06％；W10菌株的最佳培養(yǎng)條件為500mL三角瓶裝液量60mL、