臍帶間充質干細胞成脂分化的調控機制.pdf

1、研究背景與目的：成脂分化是間充質干細胞(MesenchymalStemCell，MSC)的一種基本特性。研究調控成脂分化的主要因子和相關的分子事件對明確其生物學及相關功能而言非常必要。成脂分化是一系列的復雜分子事件組成，這個過程受多條信號通路的調控，許多細胞內外因子相互作用。雖然有研究表明Wnt/β-catenin信號通路以及C/EBPα、PPARγ等調控因子在成脂分化過程中具有重要的作用，但是，由于MSC的成脂分化機制本身的復雜性和受

2、大量獲取成人MSC的制約，至今尚未有研究從蛋白質組學的角度，系統(tǒng)地研究MSC的成脂分化機制。因此，本論文首先將以臍帶作為人MSC的來源，建立人MSC分離純化和鑒定的方法，進而通過高通量蛋白質組學方法鑒定MSC成脂分化過程中差異表達的蛋白，為系統(tǒng)揭示MSC成脂分化的機制奠定基礎；同時，結合本研究室的研究結果和考慮到氧化應激在：MSC的成脂分化過程中作用，進一步探索氧化應激及其下游活性中間產物對：MSC的活性及其他生物學活性的影響，為揭示M

3、SC的成脂分化機制提供輔助證據(jù)。
　　 研究方法：以臍帶華通氏膠為MSC來源，用組織塊培養(yǎng)的方法，分離純化臍帶MSC；通過形態(tài)學觀測以及在標準的成骨成脂誘導分化條件，檢測細胞的分化潛能，并通過高通量蛋白質組學方法鑒定MSC成脂分化過程中差異表達的蛋白；同時用不同濃度的甲基乙二醛處理人臍帶MSC，以細胞計數(shù)法測定其生長曲線，MTT法檢測細胞的活性，流式細胞儀分析細胞周期；并以酶標儀檢測：MSC的胰島素抵抗。
　　 研究結果

4、：1)通過組織塊培養(yǎng)的方法可以很方便地獲得大量生長和增殖能力都很強的臍帶MSC，且具有成人MSC的絕大多數(shù)生物學特性，在誘導條件下，成脂分化和成骨分化特征明顯；
　　 2)蛋白質組學研究發(fā)現(xiàn)：成脂誘導能導致21種蛋白的表達上調2倍以上，10種蛋白下調2.5倍以上，其中，有2種蛋白只在成脂誘導條件下表達，而有1種蛋白只在對照組里表達；進一步的生物信息學分析表明，鑒定出的31種蛋白中，大部分屬于具有催化功能的細胞質內酶；NDK激酶A

5、、GIP蛋白以及GRP-75蛋白等在功能上與成脂分化密切相關；
　　 3)低濃度的甲基乙二醛(methylglyoxal，MGO)對人臍帶MSC生長與活力，細胞周期沒有顯著影響，較高濃度的MGO能顯著抑制細胞的生長與細胞活力，但基本不影響細胞對糖的攝?。欢咸烟茄趸柑幚砟茱@著抑制MSC對糖的攝取和導致胰島素抵抗。
　　 研究結論：從華通氏膠分離純化的MSC是研究MSC生物學特性和相關應用的理想細胞模型。NDK激酶A、G