基因多態(tài)性與胸心外科相關(guān)疾病易感性的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、本研究采用病例對(duì)照研究方法，對(duì)VEGF、NFATcl等基因的功能性SNPs單獨(dú)或聯(lián)合與先天性心臟病遺傳易感性的關(guān)系進(jìn)行研究，以研究先天性心臟病的發(fā)病機(jī)制和發(fā)現(xiàn)與我國(guó)人群先天性心臟病相關(guān)的危險(xiǎn)基因型，并將其作為分子標(biāo)志物用于篩選高危人群或易感個(gè)體從而為實(shí)施目標(biāo)明確的個(gè)體預(yù)防等方面具有重要的理論和實(shí)踐意義。 1.血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)與先天性心臟病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的病例對(duì)照研究采用以醫(yī)院為基礎(chǔ)的病例對(duì)照研究，采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片

2、段長(zhǎng)度多態(tài)性(Polymerase Chain Reaction-Restriction FragmentLength Polymorphism，PCR-RFLP)的方法檢測(cè)VEGF基因型；使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)enzyme linked immu-nosorbcnt assay(ELISA)方法，檢測(cè)病例組和對(duì)照組血漿中VEGF水平，結(jié)果顯示，先天性心臟病患者的血漿VEGF平均水平為252.85(±200.88)ng/L，顯著高于對(duì)照組

3、的平均水平21 1.32(±206，97)ngm(P=0.024)。同時(shí)按照先天性心臟病并發(fā)癥如紫紺型心臟病和先天性心臟病肺動(dòng)脈高壓進(jìn)行分類，發(fā)現(xiàn)血漿VEGF平均水平在肺動(dòng)脈高壓患者中273.12(+233.57)ngL和43例紫紺型心臟病患者314.70(+_291.75)ng/L大于288例對(duì)照中211.32(±206.97)ng/L，P=0.020和P=0.030，而血漿平均VEGF水平在其它92例先天性心臟病和288例非先心對(duì)照

4、中的差異并不明顯(p=0.61 1)，同時(shí)我們比較了病例和對(duì)照中不同基因型組血漿VEGF水平，在四個(gè)不同位點(diǎn)中血漿VEGF水平未發(fā)現(xiàn)明顯差別。 2.活化T細(xì)胞的核因子(NATcl)基因多態(tài)性與先天性心臟病膜周部室間隔缺損遺傳易感性的病例對(duì)照研究活化T細(xì)胞的核因子(NATcl)在瓣膜和間隔發(fā)育中起重要作用，NFATcl的多態(tài)性改變可能引起NFATcl表達(dá)的差異，因此有可能與間隔缺損或瓣膜缺損有關(guān)，本病例對(duì)照研究采用聚合酶鏈反應(yīng)(P

5、olymerase Chain Reaction，PCR)的方法檢測(cè)NFATcl短重復(fù)序列S/L基因型，采用聚合酶鏈反應(yīng).限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PolymeraseChain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism，PCR-RFLP)的方法檢測(cè)NFATcl Cys751Gly基因型，共檢測(cè)了膜周部室間隔缺損病例217名和非先心對(duì)照557名，運(yùn)用Logistic回歸模型分析NFA

6、Tcl基因型與先天性心臟病膜周部室間隔缺損發(fā)生危險(xiǎn)因素的關(guān)系 3.ETlTaql多態(tài)性與先天性心臟病易感性關(guān)系的研究?jī)?nèi)皮素1(Etl)是由內(nèi)皮和平滑肌細(xì)胞產(chǎn)生的強(qiáng)大的血管收縮肽，在不同的組織內(nèi)均發(fā)現(xiàn)存在Etl，可能與血管收縮調(diào)節(jié)、細(xì)胞增殖等有關(guān)，而研究發(fā)現(xiàn)，Etl和其G蛋白耦聯(lián)的受體在正常胚胎發(fā)育過(guò)程中起重要作用，與神經(jīng)嵴細(xì)胞的發(fā)生有關(guān)，因此有可能與先天性心臟病的易感性有關(guān)。Etl是由EDNl基因編碼的，其中Etl Taql多態(tài)

7、性為內(nèi)含子4的8000位點(diǎn)T/C的轉(zhuǎn)換，可能引起Etl表達(dá)的差異，因此可能與先天性心臟病的易感性有關(guān)，本病例對(duì)照研究采用聚合酶鏈反應(yīng).限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(Polymerase ChainReaction-Restriction Fragment Length Polymorphism，PCR-RFLP)的方法，檢測(cè)了Etl Taql基因型與先天性心臟病膜周部室間隔缺損發(fā)生危險(xiǎn)因素的關(guān)系，共檢測(cè)了膜周部室間隔缺損病例217名和非先心對(duì)照

8、557名，Logistic回歸分析表明與Etl Taql，TT基因型相比，攜帶Etl Taql CC等位基因顯著降低先天性心臟病膜周部室間隔缺損發(fā)病危險(xiǎn)(CC基因型的調(diào)整OR=0.43，95％CI=0.20-0.94). 4.亞甲基四氫葉酸還原酶基因MTHFR及相關(guān)基因多態(tài)性與先天性心臟病易感性關(guān)系的研究母親高同型半胱氨酸血癥可導(dǎo)致后代先天性心臟病發(fā)生的危險(xiǎn)性增加，補(bǔ)充葉酸能降低血漿同型半胱氨酸水平，減少先天性心臟病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)

9、。MTHFR是葉酸代謝通路中一種重要的酶，研究發(fā)現(xiàn)MTHER基因C677T多態(tài)與MTHFR酶的活性有明顯關(guān)系，MTHFRC677T多態(tài)性改變可導(dǎo)致其編碼的代謝酶熱穩(wěn)定性降低，從而影響葉酸-同型半胱氨酸代謝，與先天性心臟病的危險(xiǎn)因素有關(guān).研究發(fā)現(xiàn)，MTHFRC667T基因多態(tài)性與先天畸形有關(guān)，胎兒攜帶MTHFR667TT基因型增加胎)L2.9倍的神經(jīng)管畸形發(fā)生率，同時(shí)胎兒MTHER C677T基因多態(tài)性和先天性心臟病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)，胎兒攜帶

10、TT基因型與肺動(dòng)脈瓣狹窄，左心發(fā)育不良綜合癥，主動(dòng)脈狹窄，主動(dòng)脈瓣狹窄和主動(dòng)脈瓣下狹窄的危險(xiǎn)因素有關(guān).同時(shí)，葉酸通路的其它多態(tài)性位點(diǎn)如MTHFR A1298C、MTHFR G1793A、MTHFD T401C、MTHFD G1958A可能與胎兒葉酸代謝有關(guān)，與先天性心臟病的危險(xiǎn)因素有關(guān)。 第二部分基因多態(tài)性與肺癌易感性關(guān)系的病例對(duì)照 【目的】研究細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)基因TP53 rS1042522、p27 rs7330

11、、p21 rSl801270、CHK2 rs2236141等多態(tài)性位點(diǎn)在中國(guó)人群肺癌患者及健康對(duì)照中的分布，以研究各基因型與肺癌易感性的關(guān)系。 【方法】以醫(yī)院為基礎(chǔ)的病例對(duì)照研究方法；選擇經(jīng)組織學(xué)確診的500例新發(fā)肺癌病例及性別、年齡和地區(qū)頻數(shù)匹配的517例人群對(duì)照；通過(guò)Illumina的方法檢測(cè)包含TP53 rsl042522、p27 rs7330、p21rsl801270、CHK2 rs2236141共9個(gè)基因12個(gè)位點(diǎn)的基

12、因型。用多元logistic回歸模型計(jì)算各不同基因型人群患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)(OR)及其95％可信區(qū)間(95％CI)。 【結(jié)果】 1、各位點(diǎn)基因型在肺癌病例組與對(duì)照組中的分布TP53 rs1042522、p27 rs7330、p21rsl801270、p15 rs3088440、CHK2rs2236142、CCNBl rsl64390,CCND3 rs9529、CDC25A rs3731485、CDC25B rs3761218、

13、CDC25B rs61 16042、CDC25B rs3761220共1 1個(gè)位點(diǎn)的各基因型在病例組和對(duì)照組中的分布無(wú)顯著性差異。CHK2rs2236141的三種基因型頻率在病例組中分別為71.8％(GG)，26.0％(GT)和2.2％(TT)，而在對(duì)照組中分別為65.9％(GG)。33.7％(GT)和3.5％(TT)，兩組存在顯著性差異(P=0.009)。 2、多因素Logistic回歸分析在調(diào)整了性別、年齡和吸煙等因素和腫瘤

14、家族史后，與攜帶CHK2 rs2236141 GG基因型者比較，攜帶CHK2 rs2236141 GT基因型者患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)顯著減少了36％(校正OR=0.64，95％CI=0.48-0.84)，而攜帶CHK2 rs2236141 TT基因型者患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)則減少了54％(校正0R=0.46，95％CI=0.21-1.02).而攜帶CHK2rs2236141刪聯(lián)合基因型者患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)則減少了38％(校正OR=0.62，95％CI-0.47-

15、0.81).但CHK2基因rs2236142位點(diǎn)的多態(tài)性與肺癌的患病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)顯著性關(guān)聯(lián)。 3、分層分析 以年齡、性別、吸煙史、腫瘤家族史及病理類型對(duì)CHK2rs2236141多態(tài)性位點(diǎn)與肺癌的關(guān)聯(lián)進(jìn)行分層分析。與攜帶CHK2rs2236141 GG基因型者比較，在年齡>60歲的人群中、攜帶CHK2rs2236141GT/TT合基因型可以使其患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)減少0.48倍(95％CI=0.35-0.78)；在年齡<60歲的人群中

16、、攜帶CHK2 rs2236141GT/TT聯(lián)合基因型可以使其患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)減少O.27倍(95％CI=0.50-1.06)；在男性中、攜帶CHK2 rs2236141 GT/TT聯(lián)合基因型可以使其患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)減少0.28倍(95％CI=0.53-0.97)；在女性中、攜帶CHK2 rs2236141 GT/TT聯(lián)合基因型可以使其患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)減少0.67倍(95％CI=0.16-0.67)；在無(wú)吸煙史人群中、攜帶CHK2rs2236141

17、 GT/TT聯(lián)合基因型可以使其患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)減少0.46倍(95％CI=0.53.0.86)；在有吸煙史人群中、攜帶CHK2 rs2236141GT/TT聯(lián)合基因型可以使其患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)減少0.36倍(95％CI=0.45-0.91)；在無(wú)腫瘤家族史人群中、攜帶CHK2 rs2236141 GT/TT聯(lián)合基因型可以使其患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)減少0.30倍(95％CI=0.51-0.95)：在有腫瘤家族史人群中、攜帶CHK2 rs2236141 GTT

18、T聯(lián)合基因型可以使其患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)減少0.57倍(95％CI=0.23-0.81)；病理類型的分層發(fā)現(xiàn)在腺癌和鱗癌中、攜帶CHK2 rs2236141 GT/TT聯(lián)合基因型可以使其患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)減少，分別是腺癌減少0.45倍(95％CI=0.38-0.78)、鱗癌減少O.48倍(95％CI=0.33-0.81). 【結(jié)論】CHK2基因的多態(tài)性rs2236141位點(diǎn)可能與中國(guó)漢族人群肺癌遺傳易感性有關(guān)，有必要進(jìn)一步進(jìn)行功能研究的驗(yàn)證。