P-gp和HSP 70在膽管癌組織中表達(dá)及臨床意義的研究.pdf

1、目的: 膽管癌，從組織細(xì)胞學(xué)的角度來(lái)說(shuō)，是起源于膽管上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，包括肝內(nèi)膽管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma，ICC)，和肝外膽管癌(extrahepatic cholangiocarcinoma，ECC)其解剖位置特殊，惡性程度高，且起病隱匿，故早期診斷率很低，確診時(shí)往往己到中晚期，失去了根治性切除的機(jī)會(huì)，預(yù)后極差。腫瘤化學(xué)治療效果不佳，耐藥性強(qiáng)。研究表明，腫瘤耐藥性的發(fā)生是腫瘤化學(xué)治

2、療失敗的主要原因。自從1970年Biedler等發(fā)現(xiàn)多藥耐藥現(xiàn)象以來(lái)，對(duì)其研究頗多。而研究證實(shí)多藥耐藥蛋白中的P糖蛋白(P—glycoprotein，P—gp)是多種腫瘤產(chǎn)生自然生物類抗腫瘤藥物耐藥的主要耐藥蛋白之一，但沒(méi)有從根本上解決腫瘤的耐藥問(wèn)題。是否存在更穩(wěn)定，更保守的蛋白來(lái)調(diào)控已發(fā)現(xiàn)的耐藥蛋白呢？研究證明，熱休克蛋白70(heat shock protein，HSP70)廣泛存在于生物界，是進(jìn)化上具有高度保守性質(zhì)的蛋白質(zhì)，在應(yīng)激

3、狀態(tài)下具有穩(wěn)定細(xì)胞和保護(hù)細(xì)胞的重要功能。而P—gp和HSP70是否具有相關(guān)性引起了學(xué)者的關(guān)注。本文通過(guò)免疫組化S-P法檢測(cè)膽管癌組織中P—gp和HSP70的表達(dá)，探討其與腫瘤生物學(xué)特征之間的關(guān)系，以及兩者之間的相互關(guān)系。 方法: 1、研究對(duì)象 98例肝外膽管癌病理標(biāo)本均取自中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院病理科(1996.01—2007.03)手術(shù)切除原發(fā)性肝外膽管癌標(biāo)本。所有病人術(shù)前均未進(jìn)行放化療，并經(jīng)病理確診。其中男

4、性51例，女性47例，年齡在40-70之間，平均63歲。高/中/低分化膽管癌分別是47/35/16例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移43例，未轉(zhuǎn)移55例。按UICC進(jìn)行分期：Ⅰ期、Ⅱ期、46例，Ⅲ期、Ⅳ期、52例。 2、主要試劑 鼠抗HSP70單克隆抗體(1：50)，鼠抗P—gp單克隆抗體(1：50)，SP試劑盒均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。 3、免疫組織化學(xué)染色(SP法) 蠟塊連續(xù)切片，厚度4um。選取一張進(jìn)行常規(guī)HE

5、染色，確定組織學(xué)診斷分化程度。檢測(cè)P—gp和HSP70在膽管癌組織中的表達(dá)，操作嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。DAB顯色。采用SP法對(duì)全部標(biāo)本進(jìn)行免疫組化染色，染色前用微波爐進(jìn)行抗原修復(fù)。用已知陽(yáng)性細(xì)胞組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照，以PBS替代一抗作為陰性對(duì)照。 4、結(jié)果判定 全面觀察每張切片，隨機(jī)選擇10個(gè)高倍視野觀察。P—gp根據(jù)染色強(qiáng)度、范圍計(jì)分。染色強(qiáng)度按：無(wú)色(0分)，淡黃(1分)，棕黃(2分)，褐黃(3分)；染色范圍：<5％

6、(0分)，5％～20％(1分)，20％～50％(2分)，>50％(3分)。累計(jì)0～1分為低表達(dá)，>2分為高表達(dá)。 HSP70陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)以出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒為陽(yáng)性，染色結(jié)果分為3級(jí)：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<30％，染色顆粒黃、細(xì)、成堆為1級(jí)；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)30％—60％，染色顆粒深黃、粗、成片為2級(jí)；細(xì)胞陽(yáng)性數(shù)>60％，染色顆粒棕黃、粗大、成片為3級(jí)。 5、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。P<0.05為具有統(tǒng)計(jì)

7、學(xué)意義。 結(jié)果: 1、P—gp和HSP70蛋白的表達(dá) P—gp陽(yáng)性染色主要位于胞膜和胞漿，HSP70陽(yáng)性染色主要位于胞漿，在所有98例患者中，P—gp蛋白低表達(dá)為57例(58.2％)，高表達(dá)為41例(41.8％)。HSP70蛋白1級(jí)染色27例(27.6％)，2級(jí)染色36例(36.7％)，3級(jí)染色35例(35.7％)。 2、P—gp及HSP70與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 P—gp蛋白表達(dá)與膽管癌分化程度

8、呈正相關(guān)(r=0.254，P=0.028)，高分化膽管癌組織中P—gp蛋白的含量顯著高于低分化的膽管癌組織。P—gp的表達(dá)與年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期無(wú)關(guān)。HSP70蛋白表達(dá)與膽管癌分化程度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.236，P=0.031)，低分化膽管癌組織中HSP70蛋白的含量顯著高于高分化的膽管癌組織。HSP70蛋白表達(dá)與年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期無(wú)關(guān)。 3、HSP70及P—gp表達(dá)的關(guān)系 P—gp蛋白的

9、表達(dá)與HSP70蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.352，P=0.001)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論: 1、在膽管癌中HSP70和P—gp蛋白的表達(dá)強(qiáng)度與膽管癌的分化程度有相關(guān)性。P—gp蛋白的表達(dá)強(qiáng)度與膽管癌的分化程度明顯正相關(guān)。高分化膽管癌組織中P—gp蛋白的含量顯著高于低分化的膽管癌組織。HSP70蛋白的表達(dá)強(qiáng)度與膽管癌的分化程度明顯負(fù)相關(guān)。低分化膽管癌組織中HSP70蛋白的含量顯著高于高分化的膽管癌組織。 2、在