棗樹田間愈傷組織誘導(dǎo)及芽再生體系的應(yīng)用.pdf

1、棗樹（Ziziphus jujuba Mill.）已經(jīng)發(fā)展成為我國第一大干果樹種，快速發(fā)展的棗產(chǎn)業(yè)，迫切需要換代型品種。但棗樹雜交育種難度大，芽變選種費(fèi)時(shí)費(fèi)力，因此人們開始嘗試其它的育種方法，如多倍體育種等。本課題組前期在田間愈傷組織誘導(dǎo)及芽再生技術(shù)體系基礎(chǔ)上，建立了免嵌合體純化的多倍體誘導(dǎo)技術(shù)并創(chuàng)制了20余個(gè)棗品種和酸棗類型的純合多倍體種質(zhì)。本研究擬開展田間愈傷組織誘導(dǎo)和芽再生技術(shù)體系在原位遺傳轉(zhuǎn)化、EMS誘變等中的應(yīng)用研究，以期為免

2、嵌合體純化的轉(zhuǎn)基因育種、誘變育種等奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:
　　1.枝條粗度對(duì)芽再生有一定的影響。分別對(duì)粗度1.0-2.5cm的枝條進(jìn)行了愈傷組織誘導(dǎo)和芽再生研究，隨著枝條的增粗，出芽數(shù)隨之增多，2.0-2.5cm的枝條出芽數(shù)顯著增高，但考慮到較粗枝條的數(shù)量較少且對(duì)樹體傷害較大，因此認(rèn)為適宜的枝條粗度為1.5-2.0cm，對(duì)樹體傷害小，芽再生能力強(qiáng)。
　　2.發(fā)根農(nóng)桿菌的侵染時(shí)期影響‘大荔龍棗’枝條截面愈傷組織誘導(dǎo)和芽再

3、生能力。分別在截枝后的第1d、4d、7d、10d進(jìn)行侵染，侵染后，愈傷組織的生長短暫受抑，第20d后各處理間的愈傷組織生長量差異不大;在截枝后7d之內(nèi)進(jìn)行侵染，芽再生能力強(qiáng)，但沒有獲得轉(zhuǎn)化芽。
　　3.根癌農(nóng)桿菌菌液濃度影響‘月光棗’枝條截面愈傷組織誘導(dǎo)、芽再生能力及轉(zhuǎn)化效率。菌液濃度(OD600)在0.4-1.2范圍內(nèi)對(duì)枝條截面愈傷組織量沒有顯著影響;截枝后20d，菌液濃度為0.8的處理出芽數(shù)最多，但30d時(shí)各處理出芽數(shù)與對(duì)照之

4、間均無顯著差異，說明菌液可在前期影響愈傷組織出芽，但并不會(huì)影響最終的出芽數(shù)。本研究在菌液濃度為0.4時(shí)獲得了2個(gè)轉(zhuǎn)化芽，觀察發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)化芽生長矮小，長勢(shì)較弱，這可能是由于農(nóng)桿菌的侵染影響了枝條的生長發(fā)育。
　　4.根癌農(nóng)桿菌侵染時(shí)間對(duì)‘月光棗’枝條截面愈傷組織誘導(dǎo)、芽再生能力的影響不顯著。侵染時(shí)間分別為12h、24h、36h和48h時(shí)，愈傷等級(jí)及出芽數(shù)均無顯著差異。
　　5.根癌農(nóng)桿菌的侵染次數(shù)影響‘月光棗’枝條截面愈傷組織誘

5、導(dǎo)、芽再生能力及轉(zhuǎn)化效率。愈傷組織誘導(dǎo)后第10d，侵染3次較侵染2次或1次的愈傷組織等級(jí)低，并且也低于對(duì)照;愈傷組織誘導(dǎo)后第20d，不同侵染次數(shù)愈傷組織等級(jí)差異不明顯，但有隨著侵染次數(shù)的增多而降低的趨勢(shì)。愈傷組織誘導(dǎo)后第20d，出芽數(shù)隨著侵染次數(shù)的增多而降低，侵染1次的出芽數(shù)與對(duì)照差異不顯著，但卻顯著高于侵染2次或3次的出芽數(shù)。愈傷組織誘導(dǎo)后第30d，不同侵染次數(shù)的出芽數(shù)差異均不顯著。本試驗(yàn)也未獲得轉(zhuǎn)化芽，因此從利于出芽及省時(shí)方面考慮，