調(diào)節(jié)軟骨細(xì)胞骨架蛋白對(duì)成軟骨表型的影響.pdf

1、目的通過(guò)調(diào)節(jié)軟骨細(xì)胞骨架蛋白結(jié)構(gòu)，分析軟骨細(xì)胞成軟骨細(xì)胞表型是否發(fā)生改變，探討軟骨細(xì)胞骨架蛋白結(jié)構(gòu)改變與成軟骨細(xì)胞表型改變的關(guān)系。
　　方法體外分離、二維培養(yǎng)新西蘭兔軟骨細(xì)胞，待細(xì)胞達(dá)到一定數(shù)量后，采用三維微團(tuán)培養(yǎng)法培養(yǎng)軟骨細(xì)胞2周，隨機(jī)將軟骨細(xì)胞分為對(duì)照組、秋水仙堿組、細(xì)胞松弛素B組及丙烯酰胺組，通過(guò)加入秋水仙堿、細(xì)胞松弛素B及丙烯酰胺分別調(diào)節(jié)軟骨細(xì)胞骨架的微管、肌動(dòng)蛋白微絲及波形蛋白中間纖絲，繼續(xù)培養(yǎng)1周、3周，從大體形態(tài)、組

2、織切片HE染色、阿爾新藍(lán)染色、免疫組化染色分析成軟骨細(xì)胞表型的改變。
　　結(jié)果1.軟骨細(xì)胞行三維微團(tuán)培養(yǎng)2周后，可形成肉眼明顯可見(jiàn)的細(xì)胞微團(tuán)組織，呈扁橢圓形，色白，質(zhì)軟，彈性可;
　　2.不同藥物處理1周，質(zhì)量上發(fā)現(xiàn)對(duì)照組與秋水仙堿組、細(xì)胞松弛素B組相比無(wú)明顯差異(4.97±0.0963，4.7678±0.2997，4.84±0.3246; P＞0.05)，與丙烯酰胺組相比有較大差異(4.97±0.0963，2.8133±0

3、.2444;P＜0.05);3周時(shí)，對(duì)照組與秋水仙堿組、細(xì)胞松弛素B組及丙烯酰胺組在質(zhì)量上無(wú)明顯差異(8.8444±0.7012，8.4789±0.6473,8.4633±0.6837,8.0767±0.2779; P＞0.05);
　　3.HE染色顯示，不同藥物處理1周時(shí)，對(duì)照組、秋水仙堿組及細(xì)胞松弛素B組細(xì)胞較密集、均一，丙烯酰胺組細(xì)胞較少、分散;3周時(shí)，對(duì)照組與秋水仙堿組、細(xì)胞松弛素B組及丙烯酰胺組軟骨細(xì)胞形成類軟骨陷窩現(xiàn)象

4、，細(xì)胞分布均一;
　　4.阿爾新藍(lán)染色發(fā)現(xiàn)，不同藥物處理1周時(shí)，對(duì)照組與秋水仙堿組、細(xì)胞松弛素B組相比糖胺聚糖表達(dá)較多，各組無(wú)明顯差異(0.6012±0.0672,0.5657±0.0514,0.5686±0.0568; P＞0.05)，與丙烯酰胺組相比有較大差異(0.6012±0.0672，0.1517±0.0484; P＜0.05);3周時(shí)，對(duì)照組、秋水仙堿組、細(xì)胞松弛素B組及丙烯酰胺組糖胺聚糖均為高表達(dá)，各組間無(wú)明顯差異(1

5、.6947±0.4163，1.5416±0.3437,1.7884±0.2861,1.7382±0.3107; P＞0.05);
　　5.免疫組化染色顯示，藥物處理1周時(shí)，對(duì)照組與秋水仙堿組、細(xì)胞松弛素B組相比COLⅡ(0.0894±0.0054，0.0859±0.0024，0.0829±0.0066)表達(dá)多，COLⅠ(0.0013±0.0002，0.0017±0.0002，0.0016±0.0056)表達(dá)少，各組間無(wú)明顯差異(P

6、＞0.05);與丙烯酰胺組相比COLⅡ(0.0894±0.0054,0.0289±0.0099)、 COLⅠ(0.0013±0.0002，0.1071±0.0012)表達(dá)有較大差異(P＜0.05);3周時(shí)，對(duì)照組、秋水仙堿組、細(xì)胞松弛素B組及丙烯酰胺組COLⅡ(0.1904±0.0471,0.1904±0.0471,0.1856±0.0224,0.1772±0.0353)表達(dá)多，COLⅠ(0.0675±0.0056,0.0693±0.0

7、079,0.0722±0.0051,0.0746±0.0135)表達(dá)少，各組間無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論1.微管、肌動(dòng)蛋白微絲發(fā)生變化，不影響正常軟骨細(xì)胞特異性表型糖胺聚糖、COLⅡ繼發(fā)改變。
　　2.波形蛋白中間纖絲發(fā)生變化，短期內(nèi)出現(xiàn)軟骨細(xì)胞特異性表型糖胺聚糖、COLⅡ表達(dá)下降，纖維化軟骨細(xì)胞特異性表型COLⅠ表達(dá)增多;但延長(zhǎng)作用時(shí)間而不增加作用強(qiáng)度時(shí)，則不影響正常軟骨細(xì)胞特異性表型糖胺聚糖、COLⅡ繼發(fā)改變