超聲場下基因-模式藥物輸送及生物學效應的實驗研究.pdf

1、近年來，隨著超聲技術(shù)的發(fā)展、應用以及微泡造影劑研制的進展，超聲與微泡造影劑的協(xié)同作用在基因治療、藥物輸送、溶栓治栓、炎癥和腫瘤的靶向顯影與治療等醫(yī)學領(lǐng)域顯示了巨大的應用潛力，逐漸成為醫(yī)學領(lǐng)域研究中的一個熱點。
　　本研究選用人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVECs）、HeLa細胞作為離體細胞模型，以EGFP基因作為外源目的基因、核酸熒光染料TO-PROTM-1、PI、DAPI作為模式藥物，分別通過 MTT比色分析法、倒置熒光顯微鏡觀察法、流

2、式細胞檢測技術(shù)、MGG染色法、考馬斯亮藍染色法研究了20 kHz低頻超聲單獨和與微泡造影劑聯(lián)合介導EGFP基因轉(zhuǎn)染內(nèi)皮細胞、HeLa細胞的效率和規(guī)律、超聲與脂質(zhì)體共同介導EGFP基因轉(zhuǎn)染HeLa細胞的效率和規(guī)律、超聲介導模式藥物輸送的效率和規(guī)律以及超聲對血管內(nèi)皮細胞增殖活性、生長曲線、遷移能力和細胞骨架的影響。研究結(jié)果表明：
　　1.20 kHz低頻超聲能介導EGFP基因轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細胞和HeLa細胞，但轉(zhuǎn)染率較低，一般在0.

3、2％~2%之間；細胞類型對轉(zhuǎn)染率有影響，HeLa細胞的轉(zhuǎn)染率要高于內(nèi)皮細胞的轉(zhuǎn)染效率；質(zhì)粒濃度對轉(zhuǎn)染效率有影響，在一定范圍內(nèi)質(zhì)粒濃度越高轉(zhuǎn)染效率越大；2.超聲與脂質(zhì)體共同介導EGFP基因轉(zhuǎn)染HeLa細胞，雖然轉(zhuǎn)染效率隨超照射時間的增加而降低，但轉(zhuǎn)染率卻隨超聲照射時間的增加而增加，這可能與脂質(zhì)體對細胞的毒性有關(guān)；3.超聲聯(lián)合微泡能明顯增強 EGFP基因轉(zhuǎn)染內(nèi)皮細胞和HeLa細胞，轉(zhuǎn)染效率增加平均約3~4倍，最高分別3.5倍和4.6倍；然而