高遷移率族蛋白B1誘導(dǎo)大腸癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化與腫瘤血管新生的機(jī)制研究.pdf

1、第一部分高遷移率族蛋白B1誘導(dǎo)大腸癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的機(jī)制研究
　　目的：本研究旨在明確高遷移率族蛋白B1(HMGB1)能否誘導(dǎo)大腸癌細(xì)胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)及其潛在機(jī)制。
　　方法：運(yùn)用免疫熒光染色、PCR以及Western blot技術(shù)，檢測HMGB1及其受體是否影響癌細(xì)胞EMT標(biāo)志物的變化。采用Transwell小室實(shí)驗(yàn)與劃痕實(shí)驗(yàn)，觀察HMGB1及其受體對癌細(xì)胞侵襲能力的作用。然后，經(jīng)PCR與Western

2、blot技術(shù)篩選HMGB1誘導(dǎo)EMT相關(guān)的金屬基質(zhì)蛋白酶(MMPs)以及信號通路。
　　結(jié)果：癌細(xì)胞經(jīng)HMGB1處理后發(fā)生了EMT特有的表型改變，其侵襲能力也隨之提高，這些作用均依賴其受體RAGE。HMGB1誘導(dǎo)EMT使轉(zhuǎn)錄因子Snail和NF-κB的表達(dá)上調(diào)，同時(shí)增加MMP-7的表達(dá)，而非MMP-9的表達(dá)。
　　結(jié)論：HMGB1通過RAGE/Snail/NF-κB信號通路誘導(dǎo)腫瘤EMT的發(fā)生，并且隨之激活MMP-7的作用，

3、可見HMGB1有成為抑制大腸癌轉(zhuǎn)移靶標(biāo)的可能。
　　第二部分不同氧化-還原型的高遷移率族蛋白B1在大腸癌血管新生的雙重作用
　　目的：本研究旨在探索不同氧化-還原狀態(tài)的高遷移率族蛋白B1(HMGB1)對腫瘤血管新生的影響。
　　方法：為了測定VEGF-A的表達(dá)情況以及內(nèi)皮細(xì)胞成血管的能力，還原型HMGB1（at-HMGB1）、部分氧化型HMGB1（ds-HMGB1）、其特異性抗體（DPH1.1 mAb和2G7 mAb）

4、以及其受體的抗體（RAGE Ab和TLR4 Ab）均被用于處理內(nèi)皮細(xì)胞。而且，我們還采用癌-內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)體系來模擬腫瘤微環(huán)境。
　　結(jié)果：ds-HMGB1通過受體TLR4促使VEGF-A的分泌，at-HMGB1則通過受體RAGE增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞遷移。在癌-內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)體系中，抑制HMGB1及其受體能夠減弱HMGB1誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞成血管的能力。
　　結(jié)論：HMGB1通過不同氧化-還原狀態(tài)促使內(nèi)皮細(xì)胞遷移與VEGF-A表達(dá)，從而調(diào)