表達(dá)豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白重組新城疫病毒的構(gòu)建及其生物學(xué)特性的研究.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)屬于圓環(huán)病毒科、圓環(huán)病毒屬，是引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)、皮炎腎病綜合征(PDNS)和母豬繁殖障礙等癥狀的主要病原物，所有這些癥狀被統(tǒng)稱為豬圓環(huán)病毒相關(guān)病(PCVAD)。自1991年P(guān)MWS在加拿大被首次報道至今，該病目前已經(jīng)遍布世界各地，在我國豬群中感染發(fā)病情況也十分普遍，給養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。
　　PCV2無囊膜，其基因組為共價閉合、單股環(huán)狀負(fù)鏈DNA，大小約1.76 kb。PC

2、V2ORF2編碼的的結(jié)構(gòu)蛋白Cap是其最主要的免疫保護(hù)性抗原，能誘導(dǎo)動物機(jī)體產(chǎn)生特異性中和抗體，是研制PCV2新型疫苗的理想靶抗原。國內(nèi)外現(xiàn)有的PCV2商品化疫苗因其工藝繁瑣、價格昂貴限制了疫苗的普及應(yīng)用。
　　新城疫病毒(NDV)反向遺傳操作技術(shù)的發(fā)展為NDV作為疫苗載體防制哺乳動物疾病開辟了道路。本研究的目的是為了探索PCV2的衣殼蛋白重組NDV后在哺乳動物細(xì)胞中的表達(dá)情況，從而為研制新型PCV2疫苗提供一種思路。
　　

3、本研究利用NDV La Sota弱毒疫苗株的反向遺傳操作平臺，成功構(gòu)建表達(dá)PCV2aCap蛋白的重組病毒rLa-PCV2/Cap;為了進(jìn)一步增強(qiáng)外源蛋白的表達(dá)效果，構(gòu)建了表達(dá)去全部核定位信號(NLS)的Cap△41蛋白重組病毒rLa-PCV2/Cap△41，以及去部分NLS的Cap△18蛋白重組病毒rLa-PCV2/Cap△18;為增強(qiáng)接種后的細(xì)胞和體液免疫水平，在去掉部分NLS的基礎(chǔ)上繼續(xù)引入雞白介素2的信號肽(SP)，成功構(gòu)建出表達(dá)

4、Cap△18IL2SP蛋白的重組病毒rLa-PCV2/Cap△18IL2SP。經(jīng)過間接免疫熒光試驗(IFA)檢驗，各重組毒株均在感染的BHK-21細(xì)胞中正確、穩(wěn)定地表達(dá)了Cap及其修飾后的Cap蛋白，在去掉NLS后，Cap△41和Cap△18均從細(xì)胞核中釋放出來，并均勻存在于細(xì)胞質(zhì)中。為了研究各重組毒的生物學(xué)特性，對各重組毒的雞胚內(nèi)生長特性、雞胚平均致死時間(MDT)、雞腦內(nèi)接種指數(shù)(ICPI)、雞靜脈接種指數(shù)(IVPI)進(jìn)行了測定。測