IL-1、IL-4基因多態(tài)性與腦梗塞相關(guān)性研究.pdf

1、目的：腦梗死（Cerbral Infarction，CI）是我國人群中的一種常見病、多發(fā)病，其致殘率、致死率均較高，且近年來該病發(fā)病年齡年輕化趨勢日漸明顯。通常認(rèn)為腦梗死是由多種危險(xiǎn)因素引發(fā)，如高血壓、高血脂、糖尿病、心臟病、吸煙、酗酒等等，通過對(duì)這些危險(xiǎn)因素的控制，可延緩和降低腦梗死的發(fā)生。但在臨床實(shí)踐中我們卻經(jīng)常發(fā)現(xiàn)許多人即使同時(shí)具備上述多種危險(xiǎn)因素卻未發(fā)生腦梗死，而一些不存在危險(xiǎn)因素的人卻發(fā)生了腦梗死，這從一個(gè)方面說明腦梗死的發(fā)生

2、可能與遺傳因素具有一定的關(guān)系。有研究表明有腦梗死陽性家族史者較同年齡、同性別的陰性家族史者更易患腦梗死。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展和對(duì)腦梗死研究的深入，國內(nèi)外許多學(xué)者均認(rèn)為腦梗死是一種多種因素共同作用的遺傳性疾病。近年來對(duì)腦梗死患病易感基因及其多態(tài)性的研究成為腦梗死研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。其中炎癥細(xì)胞因子在腦梗死發(fā)病中的作用受到越來越多的重視。國內(nèi)外大量動(dòng)物及體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均發(fā)現(xiàn)，炎癥反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化、腦梗死、缺血.再灌注損傷等的發(fā)生、發(fā)展過程中起著

3、重要的作用。參與這些炎癥反應(yīng)的常見細(xì)胞因子有腫瘤壞死因子（TNF）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）、白細(xì)胞介素-4（IL-4）、白細(xì)胞介素-10（IL-10）、干擾素（IFN）、轉(zhuǎn)化生長因子（TGF）等等。其中IL-1、TNF等被認(rèn)為是主要的促炎癥反應(yīng)細(xì)胞因子，而IL-4、IL-10為抗炎癥反應(yīng)細(xì)胞因子。且研究表明TNF、IL-1、IL-4、IL-10等均具有基因多態(tài)性。本實(shí)驗(yàn)主要選取一定數(shù)量的腦梗死患者及正常人群，通過應(yīng)用特異性較高的PC

4、R方法對(duì)炎癥因子IL-1、IL-4基因多態(tài)性進(jìn)行分析，以研究這些炎癥細(xì)胞因子的基因多態(tài)性與腦梗死之間的相關(guān)性，為找到腦梗死的遺傳危險(xiǎn)因子尋找更多證據(jù)，并為基因診斷在腦梗死疾病中的應(yīng)用進(jìn)行初步探索。
　　 方法：
　　 1.選取82例“腦梗死”患者作為病例研究組（CI組），并記錄其有無高血壓、糖尿病、高脂血癥、吸煙及飲酒病史。同時(shí)隨機(jī)選取同期來我院體檢的健康人群82人做為正常對(duì)照組（正常組）。
　　 2.對(duì)入選對(duì)象

5、抽取清晨空腹外周靜脈血3ml（EDTA抗凝），用DNA基因提取試劑盒提取DNA基因。
　　 3.參考文獻(xiàn)報(bào)道，采用聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reation，PCR）對(duì)目的基因片段進(jìn)行擴(kuò)增，經(jīng)電泳證實(shí)PCR產(chǎn)物。
　　 4.利用特異性內(nèi)切酶對(duì)擴(kuò)增片段進(jìn)行切割，即限制性片段長度多態(tài)性分析法（restriction fragment length polymorphism，RFLP）對(duì)入選對(duì)象進(jìn)行IL-1

6、α-889C/T、IL-1β+3953C/T、 IL-1β-511C/T、 IL-4-590C/T、 IL-4+33C/T基因位點(diǎn)進(jìn)行多態(tài)性檢測分析。電泳觀察記錄酶切結(jié)果。
　　 5.隨機(jī)選取部分標(biāo)本送檢進(jìn)行測序以驗(yàn)證酶切結(jié)果。
　　 6.相關(guān)分析：首先各組研究對(duì)象的基因型分布經(jīng)過Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)證明其有群體代表性。然后應(yīng)用統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各因子基因型及其等位基因數(shù)均采用直接計(jì)數(shù)法并計(jì)算其

7、基因頻率，組間資料比較用x2檢驗(yàn)，分析所研究的各個(gè)因子的基因多態(tài)性與腦梗死的發(fā)生是否具有相關(guān)關(guān)系。再經(jīng)過Logistic回歸分析校正其它常見有意義的腦梗死危險(xiǎn)因素，以確定所研究的細(xì)胞因子基因多態(tài)性是否為腦梗死的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
　　 結(jié)果：
　　 1.經(jīng)Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)證實(shí)所選各組研究對(duì)象基因型分布均具有群體代表性（P>0.05）。
　　 2.CI組IL-1α（-889C/T）CC、CT、TT三

8、種基因型分布頻率分別為56.10％、31.71％、12.20％，正常組三種基因型分布頻率分別為82.93％、14.63％、2.44％，兩組比較IL-1α（-889C/T）基因型分布具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（x2=14.737，P=0.001<0.05）。cI組C、T等位基因分布頻率為71.95％、28.05％，正常組C、T等位基因分布頻率為90.24％、9.76％，兩組比較C、T等位基因分布頻率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（x2=17.900，P=0.000<0

9、.05）。
　　 3.CI組IL-1β（+3953C/T）、IL-1β（-511C/T）基因型分布及等位基因頻率與正常對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　 4.IL-4（-590C/T）、IL-4（+33C/T）基因型分布及等位基因頻率在腦梗死與正常對(duì)照組間分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　 5.將腦梗死常見危險(xiǎn)因素：高血壓、糖尿病、高脂血癥、吸煙、飲酒以及II-1α（-889C/T）的CC、CT

10、、TT基因型納入Logistic回歸方程發(fā)現(xiàn)所研究的IL-1α-889基因TT型等位基因及高血壓、吸煙均與腦梗死的患病具有一定的相關(guān)性。
　　 結(jié)論：
　　 1.腦梗死可能是多種因素共同作用的復(fù)雜的遺傳性疾病。
　　 2.IL-Iα（-889C/T）基因多態(tài)性與石家莊地區(qū)人群腦梗死的易患性可能具有一定的相關(guān)性，攜帶IL-1α（-889C/T）TT基因型可能增加人群對(duì)腦梗死的易患性。
　　 3.IL-1β（