花粉介導(dǎo)法獲得轉(zhuǎn)耐鹽基因玉米植株及轉(zhuǎn)化后代的耐鹽性鑒定.pdf

1、玉米在國民經(jīng)濟中占有重要地位,隨著人民生活水平的不斷提高對玉米的需求也日益增高。我國鹽漬化土地面積有日趨增加的趨勢。為了培育出耐鹽性增強的玉米新品種,以充分利用我國的鹽堿化土地,本課題圍繞三個方面開展了研究,研究內(nèi)容及結(jié)果如下:
　　(1)采用超聲波輔助花粉介導(dǎo)植物轉(zhuǎn)基因方法,將甜菜堿醛脫氫酶(BADH)基因?qū)胗衩鬃越幌掂?8,收獲T0代種子246粒,T1代植株經(jīng)卡那霉素抗性篩選及PCR檢測獲得37株陽性植株,轉(zhuǎn)化率為15.04

2、％(以收獲的 T0代種子為基數(shù))。T2代陽性植株檢出率達55%~63%,T2代PCR陽性植株Southern雜交分析發(fā)現(xiàn),BADH基因已經(jīng)整合到部分玉米植株的染色體基因組上,并能遺傳給后代。研究還證明,超聲波輔助花粉介導(dǎo)法是一種經(jīng)濟、高效、實用的植物基因轉(zhuǎn)化方法。
　　(2)用不同濃度的NaCl溶液對T2代轉(zhuǎn)基因玉米植株與對照進行鹽脅迫處理,結(jié)果表明:轉(zhuǎn)BADH基因玉米植株表現(xiàn)出一定的抗逆性,生長狀況明顯優(yōu)于對照;根據(jù)非轉(zhuǎn)化苗對N

3、aCl的反應(yīng)以及生長狀況,確定250 mmol/L NaCl溶液為玉米幼苗耐鹽性篩選的最適濃度;在此臨界濃度下,玉米形態(tài)指標(biāo)和生理生化指標(biāo)的測定結(jié)果表明,與對照相比,轉(zhuǎn)基因植株的株高提高了10.94%~25.7%,鮮重增加了8.62%~18.2%,干重增加了9%~18.18%,相對電導(dǎo)率降低37.21%~58.14%,葉綠素含量增加了15.89%~90.65%,超氧化物歧化酶活性提高64.92%~148.29%,丙二醛含量減少26.97

4、%~48.05%。以上結(jié)果表明,轉(zhuǎn)入甜菜堿醛脫氫酶基因提高了玉米的耐鹽性。
　　(3)采用Hoagland營養(yǎng)液水培方法,研究了不同濃度的NaCl脅迫條件下,轉(zhuǎn)TaNHX2基因玉米自交系昌7-2和非轉(zhuǎn)基因?qū)φ盏挠酌缟L情況、植株形態(tài)和生理指標(biāo)的差異。結(jié)果顯示,隨著鹽脅迫濃度的增加,轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因玉米植株的株高、根長、鮮重、干重和葉綠素含量逐漸下降,丙二醛含量逐漸上升,但是轉(zhuǎn)基因玉米的變化幅度較小,在幾乎所有脅迫濃度下,轉(zhuǎn)基因玉米