依達(dá)拉奉對(duì)骨骼肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:缺血組織恢復(fù)血供后組織損傷進(jìn)一步加重的現(xiàn)象即缺血再灌注損傷。肢體創(chuàng)傷修復(fù)、游離組織移植、斷肢再植等都遭受缺血再灌注損傷,造成骨骼肌功能障礙。自由基在組織缺血再灌注過程中具有重要作用,依達(dá)拉奉是日本厚生省于2001年批準(zhǔn)上市的新型強(qiáng)效自由基清除劑,本實(shí)驗(yàn)建立兔后肢缺血再灌注模型,肢體恢復(fù)血供前給予依達(dá)拉奉,觀察其對(duì)后肢骨骼肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。
　　 方法:選取健康成年新西蘭大耳白兔30只,雌雄不限,體重2～2.5kg

2、,隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組、假手術(shù)組,每組10只。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉平穩(wěn)后取仰臥位,沿股神經(jīng)、血管走行方向切開皮膚,顯露股動(dòng)靜脈,然后無(wú)創(chuàng)血管夾夾閉股動(dòng)靜脈阻斷血流,并用止血帶于股鞘下環(huán)扎肢體阻斷側(cè)支循環(huán)維持缺血3h,實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物于再灌注前30min經(jīng)耳緣靜脈輸注1.5m1./kg依達(dá)拉奉注射液；對(duì)照組相同方法制作缺血模型,于再灌注前30min輸注30ml生理鹽水；假手術(shù)組顯露股動(dòng)靜脈不阻斷血流,曠置6小時(shí)后取材。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組恢復(fù)肢體血液循環(huán)3

3、h后取材。抽取左側(cè)股靜脈血2ml,4℃,2500r/min條件下離心15min,提取血清利用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)含量,放射免疫法測(cè)定ET含量,硝酸還原酶法550nm波長(zhǎng)處測(cè)定血清NO的含量,取脛前肌組織0.1g,按1:9的質(zhì)量體積比加入冷生理鹽水中,制成10％的勻漿液,低溫(4℃)下1000rpm/min離心30min,取上清液硫代巴比妥酸法532nm處分光光度計(jì)測(cè)算丙二醛(MDA)含量,黃嘌呤氧化

4、酶法270nm處測(cè)算髓過氧化物酶(MPO)含量,550nm波長(zhǎng)處測(cè)定肌肉勻漿中超氧化物歧化酶(SOD)活性,取0.5g脛前肌測(cè)量濕干比,光鏡觀察脛前肌組織細(xì)微結(jié)構(gòu)改變。
　　 結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組SOD活性(173.98±12.91)U/g大于對(duì)照組(87.71±4.46)U/g(P＜0.05),小于空白組(208.51±10.74)U/g(P＜0.05)；實(shí)驗(yàn)組MDA、MPO含量、W/D值(42.81±4.11)μmol/g,(4.2

5、8±0.57)U/g,(4.67±0.65)低于對(duì)照組(74.09±6.21)μmol/g,(8.54±0.74)U/g,(6.09±0.56)(P＜0.05),實(shí)驗(yàn)組MDA、MPO含量高于假手術(shù)組(29.73±4.17)μmol/g,(1.66±0.49)U/g(P＜0.05),實(shí)驗(yàn)組與假手術(shù)組W/D值無(wú)差異(P=0.386＞0.05),以上指標(biāo)在對(duì)照組與假手術(shù)組之間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)組NO含量(117.22±10

6、.67)μmol/L大于對(duì)照組(66.23±6.40)μmol/L(P＜0.05),與空白組比較無(wú)差異(P=0.186＞0.05):實(shí)驗(yàn)組CK、LDH含量(5640±641)U/L,(489.2±44.9)U/L低于對(duì)照組(7930±623)U/L(593.0±35.9)U/L(P＜0.05),高于假手術(shù)組(1985±347)U/L(265.5±23.7)U/L(P＜0.05),以上指標(biāo)在對(duì)照組與假手術(shù)組之間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.0

7、5),ET-1含量在三組間無(wú)差異(P＞0.05)。光鏡結(jié)果顯示對(duì)照組肌纖維腫脹,部分?jǐn)嗔?較多肌細(xì)胞橫紋模糊不清,間質(zhì)明顯水腫,炎性細(xì)胞滿視野浸潤(rùn)；實(shí)驗(yàn)組肌纖維基本正常,間質(zhì)輕度水腫,少見或偶見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；假手術(shù)組肌纖維呈幾乎正常的組織學(xué)改變。
　　 結(jié)論:再灌注早期給予強(qiáng)效的自由基清除劑依達(dá)拉奉可以保護(hù)骨骼肌缺血再灌注損傷,通過清除或抑制自由基的產(chǎn)生,減輕自由基引起的生物膜結(jié)構(gòu)脂質(zhì)過氧化、微循環(huán)內(nèi)皮功能障礙導(dǎo)致的無(wú)復(fù)流現(xiàn)象,