KIR基因組合型與腎移植術(shù)后急性排斥反應(yīng)關(guān)系的研究.pdf

1、在腎臟移植后早期發(fā)生的排斥反應(yīng)中HLA-Ⅰ-KIR是否參與免疫應(yīng)答作用是我們將探討的問題，本研究擬在腎移植傳統(tǒng)配型基礎(chǔ)上，觀察KIR基因在人群中的頻率及基因組合型的分布，分析腎移植供受者的KIR抑制型基因組合型與急性排斥反應(yīng)的關(guān)聯(lián)。本論文分為以下三章。 第一章:殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體KIR基因的檢測(cè) 目的:調(diào)查尿毒癥患者殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體KIR基因的頻率。 方法:選擇本移植中心55例等候腎臟移植的尿毒癥患

2、者，抽取靜脈血。根據(jù)2006年11月10日IDP KIR序列數(shù)據(jù)庫(kù)（www． ebi．a(chǎn)c．uk/ipd/kir）公布的KIR堿基編碼序列（release1．3．0），共設(shè)計(jì)23對(duì)上下游引物序列均經(jīng)過BLAST軟件驗(yàn)證，可識(shí)別16個(gè)KIR基因，包括14個(gè)功能基因和2個(gè)沉默基因。測(cè)定DNA濃度和純度，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)序列特異引物分型技術(shù)（polymerase chain recation-sequences specific prime

3、r，PCR-SSP），檢測(cè)55例等候腎臟移植的尿毒癥患者的KIR基因頻率并與韓國(guó)人、日本人、南亞人群中的KIP基因頻率進(jìn)行比較。 結(jié)果:55例等候腎臟移植的尿毒癥患者檢測(cè)出全部16個(gè)KIR基因，包括14個(gè)功能基因（2DL1、2DL2、2DL3、2DL4、2DL5、3DL1、3DL2、3DL3、2DS1、2DS2、2DS3、2DS4、2DS5、3DS1）和2個(gè)沉默基因（2DP1，3DP1）。其中，2DL4、3DL2、3DL3、3D

4、P1基因頻率1．00；2DL1、2DL3、3DL1、2DS4基因頻率0．73～0．87；2DL2、2DS1、2DS2、2DS3、2DS5基因頻率0．11～0．25；2DL5、3DS1、2DP1基因頻率0．30～0．41。對(duì)等候腎臟移植的尿毒癥患者與部分亞洲地區(qū)人群的KIR基因頻率比較分析中發(fā)現(xiàn)，2DL4、3DL1、3DL2、3DL3、2DS4（GF0．73～1．00）和2DL2、2DL5、2DS1、2DS3、2DS5、3DS1（GF0．

5、11～0．34）與韓國(guó)人、日本人、南亞人之間相差<0．20；2DL1、2DL3、2DS2與韓國(guó)人、日本人、南亞人群之間相差≥0．2，2DL1低于日本人，2DS2低于南亞人，2DL3高于南亞人。 結(jié)論:55例等候腎臟移植的尿毒癥患者普遍帶有KIR結(jié)構(gòu)基因2DL4、3DL2、3DL3、3DP1，其次為2DL3、3DL1、2DL1、2DS4，較罕見2DP1、3DS1、2DL5及2DL2、2DS1、2DS2、2DS5、2DS3。這些患者

6、中14個(gè)KIR功能基因與亞洲其他人群KIR基因頻率接近，但是KIR基因多態(tài)性與上述不同種族之間存在分布差異。 第二章:殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體KIR基因組合型的分析 目的:探討人類殺傷細(xì)胞免疫球蛋白受體KIR基因組合類型的分布。 方法:調(diào)查志愿者中國(guó)漢族67人，抽取靜脈血。根據(jù)2006年11月10日IDP KIR序列數(shù)據(jù)庫(kù)（www． ebi．a(chǎn)c．uk/ipd/kir）公布的KIR堿基編碼序列（release1．

7、3．0），共設(shè)計(jì)23對(duì)上下游引物序列，經(jīng)BLAST軟件驗(yàn)證可識(shí)別16個(gè)KIR基因及等位基因，測(cè)定DNA濃度和純度，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)序列特異引物分型技術(shù)（PCR-SSP）調(diào)查和分析67例中國(guó)人的KIR基因和基因組合型頻率。 結(jié)果:本文中國(guó)人群檢測(cè)出16個(gè)KIR基因，包括14個(gè)功能基因（2DL1、2DL2、2DL3、2DL4、2DL5、3DL1、3DL2、3DL3、2DS1、2DS2、2DS3、2DS4、2DS5、3DS1）和2個(gè)

8、沉默基因（2DP1，3DP1）。由14個(gè)KIR功能基因組成的KIR基因組合型供檢測(cè)出25個(gè)，其中僅KIR-2DL1-2DL3-2DL4-3DL1-3DL2-3DL3-2DS4基因組合型的分布頻率達(dá)到0．373，而其余24個(gè)KIR基因組合型頻率均≤0．09。本文檢測(cè)的中國(guó)人群25個(gè)KIP基因組合型與已報(bào)道的日本人群、韓國(guó)人群和高加索人群中KIR基因組合型累計(jì)有56個(gè)KIR基因組合型。比較4個(gè)人群間KIR基因組合型，有5種基因組合型為4個(gè)人

9、群所共有，4個(gè)人群間KIR基因組合型共享率為8．93%（5/56）。此外，有3種基因組合型為本文中國(guó)人群、韓國(guó)人群和高加索人群所共有，在日本人群中未見報(bào)道，本文中國(guó)人群、韓國(guó)人群和高加索人群KIR基因組合型共享率為為5．36%（3/56）；有1種基因組合型為本文中國(guó)人群和高加索人群所共有，本文中國(guó)人群和高加索人群間KIR基因組合型共享率為1．79%（1/56）。16種基因組合型為本文中國(guó)人群所獨(dú)有28．58%（16/56）；2種基因組合

10、型為日本人群所獨(dú)有3．57%（2/56）；9種基因組合型為韓國(guó)人群所獨(dú)有16．07%（9/56）；16種基因組合型為高加索人群所獨(dú)有28．58%（16/56）； 結(jié)論:在本文檢測(cè)到國(guó)人25個(gè)KIR基因組合型中，僅有以傳導(dǎo)抑制信號(hào)為主的基因組合型KIR-2DL1-2DL3-2DL4-3DL1-3DL2-3DL3-2DS4的分布頻率較高，其余24種基因組合型分布頻率較低，并且基因組合型KIR-2DL1-2DL3-2DL4-3DL1-

11、3DL2-3DL3-2DS4在四個(gè)民族和地區(qū)人群中均分布最高。 第三章:抑制型KIR基因組合型與腎移植急性排斥反應(yīng)的關(guān)系 目的：探討抑制型KIR基因組合型（AA類型）傳導(dǎo)通路與尸體腎移植受者發(fā)生急性排斥反應(yīng)（AR）的關(guān)系。 方法：抽取本移植中心24對(duì)供受者靜脈血。根據(jù)2006年11月10日IDP KIR序列數(shù)據(jù)庫(kù)（www． ebi．a(chǎn)c．uk/ipd/kir）公布的KIR堿基編碼序列（release1．3．0），

12、共設(shè)計(jì)23對(duì)上下游引物序列，經(jīng)BLAST軟件驗(yàn)證可識(shí)別16個(gè)KIR基因，包括14個(gè)功能基因（2DL1、2DL2、2DL3、2DL4、2DL5、3DL1、3DL2、3DL3、2DS1、2DS2、2DS3、2DS4、2DS5、3DS1）和2個(gè)沉默基因（2DP1，3DP1）。測(cè)定DNA濃度和純度。應(yīng)用PCR-SSP方法檢測(cè)24對(duì)腎臟移植供受者的KIR基因組合型，參照Marsh等在WHO-KIR命名委員會(huì)2002年發(fā)表的報(bào)告，將14個(gè)KIR功能

13、基因的組合界定為抑制型KIR（L-KIR）基因組合型和非抑制型KIR（non-L-KIR）基因組合型。抑制型基因組合型是由多個(gè)抑制性KIR（L-KIR）基因（2DL1，2DL3，2DL4，3DL1，3DL2，3DL3）和單個(gè)激活性（S-KIR）基因（2DS4）組成的KIR基因組合型編為AA類型。而非抑制型基因組合的兩種類型（BB，AB）為由多個(gè)L-KIR基因（2DL1，2DL3，2DL4，3DL1，3DL2，3DL3）與除2DS4外的S

14、-KIR基因（2DS1，KIR-2DS2，KIR-2DS3，KIR-2DS5，KIR-3DS1）組成的KIR基因組合型編為BB類型；由多個(gè)L-KIR基因（2DL1，2DL3，2DL4，3DL1，3DL2，3DL3）和含有2DL4的多個(gè)S-KIR基因（2DS1，2DS2，2DS3，2SD4，2DS5，3DS1）組成的KIR基因組合型編為AB類型。 結(jié)果：24對(duì)供受者中AA類型基因組合型的供者9例，受者10例；BB類型基因組合型供者

15、為3例，受者4例，AB類型基因組合型供者12例，受者10例。AA類型基因組合型受者術(shù)后急性排斥反應(yīng)的發(fā)生率10%（1/10）； BB和AB類型基因組合型的受者術(shù)后急性排斥反應(yīng)的發(fā)生率64．29%（9/14），兩組急性排斥反應(yīng)的發(fā)生率呈顯著差異（P<0．05）。供者AA類型基因組合型受者術(shù)后急性排斥反應(yīng)的發(fā)生率11．11%（1/9），供者BB和AB類型基因組合型的受者術(shù)后急性排斥反應(yīng)的發(fā)生率60%（9/15）（P<0．05）。供受者均AA