NMDA受體NR2B亞基在嚴重創(chuàng)傷應(yīng)激大鼠下丘腦中的表達變化及初步機制研究.pdf

1、機體在嚴重創(chuàng)傷后，下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸(Hypothalamic-pituitary-adrenal，HPA)的激活通過分泌糖皮質(zhì)激素對免疫、炎癥反應(yīng)以及代謝的調(diào)節(jié)，對機體起著保護性作用。然而，過度而持久的HPA軸活化則可能會引起嚴重的繼發(fā)性傷害。多篇文獻報道了嚴重?zé)齻?、?chuàng)傷及重癥患者糖皮質(zhì)激素持續(xù)性增高，并且與患者的預(yù)后密切相關(guān)。因此，如何防止HPA軸過度激活所導(dǎo)致的繼發(fā)性傷害就成為了臨床上治療嚴重創(chuàng)傷所需要解決的關(guān)鍵問題。

2、r>　　 谷氨酸及其離子型NMDA受體(N-methyl-D-aspartic acid，NMDA)參與了多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)生理和病理活動如突觸可塑性，學(xué)習(xí)記憶，腦缺血，癲癇等。研究表明谷氨酸離子型NMDA受體尤其是NR2B亞基高度表達于下丘腦室旁核(Paraventricular nucleus，PVN)及視上核神經(jīng)元中。隨著研究的深入，NR2B亞基對NMDA受體功能發(fā)揮及其在下丘腦PVN神經(jīng)元興奮性調(diào)節(jié)中的作用引起了學(xué)者的廣泛關(guān)注。

3、
　　 同時，在嚴重創(chuàng)傷后下丘腦室旁核神經(jīng)元釋放的促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(Corticotropin-releasing Hormone，CRH)及其受體的表達也明顯增高，在HPA軸活性調(diào)節(jié)及血液中糖皮質(zhì)激素的升高中發(fā)揮著十分重要的作用。此外有研究發(fā)現(xiàn)，急性應(yīng)激反應(yīng)能夠引起PVN神經(jīng)元NMDA受體亞基的表達發(fā)生變化，并且CRH可能對這一變化有著重要作用。但是，目前對于嚴重創(chuàng)傷后下丘腦NMDA受體亞基表達的變化及其在HPA軸活化

4、狀態(tài)變化中的作用，以及作為應(yīng)激反應(yīng)中關(guān)鍵激素的CRH是否參與了嚴重創(chuàng)傷后NMDA受體亞基表達的調(diào)控，尚不十分清楚。
　　 現(xiàn)用的創(chuàng)傷模型主要包括槍彈傷，爆炸傷，撞擊傷及燙傷，因槍彈傷，爆炸傷，撞擊傷對致傷條件及參數(shù)難以精確控制，所得到的動物模型在損傷程度，損傷部位等不統(tǒng)一，不利于創(chuàng)傷后應(yīng)激反應(yīng)的研究。故本實驗采取國際上常用的致傷部位及程度易控制的30%體表面積背腹部皮膚Ⅲ度燙傷模型為嚴重創(chuàng)傷模型。利用放射免疫法測定血清中皮質(zhì)醇濃

5、度，反應(yīng)嚴重燙傷后大鼠HPA軸活性變化，并采用免疫組織化學(xué)及western印跡方法觀察大鼠下丘腦組織NMDA受體NR1，NR2B亞基表達變化。此外，為了進一步證實CRH對嚴重燙傷后大鼠下丘腦NMDA受體NR1，NR2B表達的調(diào)控作用，采取大鼠側(cè)腦室內(nèi)置管注射的方法，觀察不同濃度的CRH及其拮抗劑CP154，526對大鼠NR2B亞基表達水平的影響，分別運用了RT-PCR及免疫組織化學(xué)方法檢測了NMDA受體NR1及NR2B的RNA及蛋白表達

6、水平。
　　 主要結(jié)果及結(jié)論如下：
　　 1.嚴重燙傷后大鼠血清皮質(zhì)醇濃度升高，在燙傷后6h時最明顯，傷后48h仍然維持在較高的濃度，而這一作用可以被CRH受體1拮抗劑CP154，526和NMDA受體拮抗劑MK-801部分拮抗。在注射CP154，526和MK-801組血清皮質(zhì)醇濃度較6h時明顯下降。血清皮質(zhì)醇濃度升高反應(yīng)在側(cè)腦室注射CRH時也同樣出現(xiàn)。與正常生理鹽水組大鼠血清皮質(zhì)醇濃度44.5±4.6 ng/ml相比較，

7、側(cè)腦室注射注射CRH后血清皮質(zhì)醇的含量明顯增加199.5±18.4 ng/ml，并且隨著CRH濃度增高而升高，而CP-154，526能夠拮抗這一反應(yīng)所拮抗。這就說明CRH與NMDA受體信號通路可能在嚴重燙傷后HPA軸興奮持續(xù)性增高中發(fā)揮著重要的作用。
　　 2.下丘腦免疫組織化學(xué)染色及western-bloting檢測結(jié)果顯示：NR1亞基在嚴重?zé)齻蟊磉_增加，尤其以24小時最為明顯，一直持續(xù)到48h。而在注射CP154，526組

8、卻沒有明顯的增加。NR2B的表達出現(xiàn)了與NR1相反的結(jié)果，在6小時顯著減少，而后出現(xiàn)表達增加。同時，與傷后6h相比較注射CP154，526組NR2B的表達量增加。這就說明嚴重燙傷后CRH的表達增加可能引起NR2B表達減少，而這一作用可以被CP154，526所逆轉(zhuǎn)，進而說明CRH對NR2B的下調(diào)可能是HPA軸興奮性升高的機制之一。
　　 3.通過RT-PCR方法檢測了各組側(cè)腦室注藥后下丘腦NR2B的表達情況。與注射生理鹽水組，注射

9、CP154，526組及CRH+CP154，526組下丘腦NR2B的表達沒有明顯的變化，但在低濃度及高濃度CRH組卻明顯下降，且有隨著CRH濃度升高而降低的趨勢。同時，為了進一步闡明CRH對下丘腦NR1表達的影響，本實驗也對下丘腦NR1的表達進行了檢測，與注射生理鹽水組相比較，注射CRH組NR1的表達沒有明顯的變化。進一步的NR2B免疫組化染色結(jié)果也提示NR2B的表達隨著CRH的濃度升高而減少，說明NR2B受到CRH的調(diào)控。