PTEN抑制劑對(duì)脊髓損傷神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制研究.pdf

1、第一部分PTEN/mTOR信號(hào)通路相關(guān)蛋白在不同時(shí)期大鼠脊髓中的表達(dá)
　　目的:本實(shí)驗(yàn)旨在闡述發(fā)育過(guò)程中大鼠脊髓PTEN/mTOR信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的變化。
　　方法:E15、P0、P7、P56SPF級(jí)SD大鼠共42只。采用免疫熒光化學(xué)染色和Westernblotting法分別檢測(cè)脊髓組織中PTEN/mTOR信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:Westernblotting法結(jié)果顯示,E15總PTEN表達(dá)量極少,P0

2、時(shí)表達(dá)量顯著增多,到P7時(shí)達(dá)到高峰,后又逐漸下降;Akt在整個(gè)過(guò)程表達(dá)量未見(jiàn)明顯改變;免疫熒光化學(xué)染色法結(jié)果顯示,脊髓前角PTEN陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)于出生后逐漸增多,且可見(jiàn)PTEN在細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核均有表達(dá);而p-PTEN陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)逐漸減少;p-S6陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)呈逐漸減少。
　　結(jié)論:大鼠脊髓發(fā)育過(guò)程中伴隨著PTEN信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的變化。提示PTEN/mTOR信號(hào)通路可能對(duì)維持脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的正常生長(zhǎng)有著重要的作用。
　　第二

3、部分PTEN/mTOR信號(hào)通路相關(guān)蛋白在大鼠脊髓損傷后的表達(dá)
　　目的:本實(shí)驗(yàn)旨在闡述PTEN/mTOR信號(hào)通路相關(guān)蛋白在大鼠實(shí)驗(yàn)性脊髓損傷后的表達(dá)、時(shí)間分布規(guī)律及其在脊髓損傷發(fā)生、發(fā)展中的作用。
　　方法:成年SPF級(jí)36只SD大鼠(重量220±20g),對(duì)照組僅做椎板切除術(shù),損傷組采用改良Allen's法制作大鼠急性脊髓損傷(SCI)模型,分別于造模后1d、3d處死取材。采用免疫熒光化學(xué)染色和Westernblottin

4、g法檢測(cè)脊髓組織中PTEN/mTOR信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:與對(duì)照組相比,脊髓損傷后PTEN表達(dá)早期未見(jiàn)明顯變化,3d時(shí)下降明顯,而p-S6的表達(dá)早期也未見(jiàn)明顯變化,3d時(shí)明顯升高。脊髓損傷后大鼠脊髓前角神經(jīng)元PTEN的表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在3d時(shí)減少。
　　結(jié)論:PI3K/PTEN/AKT/mTOR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中重要的調(diào)節(jié)位點(diǎn)PTEN在實(shí)驗(yàn)性脊髓損傷后的表達(dá)下降,而下游分子p-S6表達(dá)正好相反;提示該信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在介

5、導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性脊髓損傷的發(fā)生、發(fā)展的過(guò)程中可能起著重要作用。將PTEN作為靶點(diǎn),利用其抑制劑進(jìn)行干預(yù)可能對(duì)脊髓損傷產(chǎn)生保護(hù)作用。
　　第三部分PTEN抑制劑對(duì)大鼠脊髓損傷后細(xì)胞凋亡的影響
　　目的:觀察PTEN抑制劑bpv(pic)對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠脊髓損傷后細(xì)胞凋亡的影響。
　　方法:成年SPF級(jí)60只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、損傷組和藥物組。其中,對(duì)照組僅做椎板切除術(shù),損傷組采用改良Allen′s法制作大鼠急性脊髓損傷(SCI)

6、模型,藥物組損傷造模前通過(guò)腹腔注射PTEN抑制劑bpv(pic)(20μg/100g)。分別于傷后1d、3d處死取材,對(duì)脊髓損傷區(qū)行細(xì)胞凋亡TUNEL標(biāo)記,同時(shí)采用BBB評(píng)分方法觀察各組神經(jīng)功能的恢復(fù)情況。
　　結(jié)果:損傷組和藥物組均可見(jiàn)到TUNEL陽(yáng)性的凋亡細(xì)胞。藥物組較損傷組凋亡陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)有所減少,且神經(jīng)功能得到改善。兩組相比在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異(P<0.05)。
　　結(jié)論:PTEN抑制劑bpv(pic)能減少繼發(fā)性脊

7、髓損傷細(xì)胞凋亡,起到保護(hù)作用及促進(jìn)大鼠神經(jīng)功能的恢復(fù)。
　　第四部分PTEN抑制劑對(duì)大鼠脊髓損傷后內(nèi)源性干細(xì)胞的影響
　　目的:觀察PTEN抑制劑對(duì)脊髓損傷后內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的影響。
　　方法:成年SPF級(jí)30只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、損傷組和藥物組。損傷后連續(xù)注射BrdU50mg/kg/d,持續(xù)7天。對(duì)照組僅做椎板切除術(shù),損傷組采用改良Allen′s法制作大鼠急性脊髓損傷(SCI)模型。藥物組損傷造模前通過(guò)腹腔注射P