骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞骨向分化過程中cx3cl1基因表達(dá)分析.pdf

1、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有多向分化潛能，其取材、分離、純化相對(duì)容易，細(xì)胞增殖能力較強(qiáng)，無論在體外和體內(nèi)均能很好地被轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)為成骨細(xì)胞，已成為常用的骨組織工程種子細(xì)胞來源之一。 盡管目前已建立較好的BMSCs骨向分化的誘導(dǎo)體系，但其誘導(dǎo)機(jī)制的尚未明晾，在本課題組的前期研究中，運(yùn)用基因芯片技術(shù)，分析BMSCs骨向分化過程中基因表達(dá)模式，發(fā)現(xiàn)cx3c11基因與BMSCs的骨向分化密切相關(guān)。因此，本研究采用定量PCR方法進(jìn)一步分析cx3c11

2、基因在BMSCs體外骨向分化過程中的表達(dá)情況及其規(guī)律，以揭示其可能的作用機(jī)理。 研究方案：①本實(shí)驗(yàn)從大鼠脛骨抽取骨髓，采用密度梯度離心結(jié)合貼壁培養(yǎng)法分離純化BMSCs，傳代擴(kuò)增，并進(jìn)行常規(guī)骨向分化誘導(dǎo)。通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察及MTT分析觀察細(xì)胞生長(zhǎng)及增殖情況，并采用定性和定量堿性磷酸酶檢測(cè)、Von Kossa’s礦化結(jié)節(jié)染色等方法檢測(cè)細(xì)胞骨向誘導(dǎo)分化結(jié)果。②采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，對(duì)cx3c11基因在BMSCs骨向分化不同時(shí)期(

3、4天、1周、2周，3周)的表達(dá)及其變化趨勢(shì)進(jìn)行定量分析。 研究結(jié)果：①采用密度梯度離心及貼壁培養(yǎng)法相結(jié)合的分離培養(yǎng)方法能有效分離、純化大鼠BMSCs，經(jīng)骨向誘導(dǎo)分化的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞群落中可見礦化結(jié)節(jié)，細(xì)胞ALP活性顯著提高，Von Kossa’s礦化結(jié)節(jié)染色陽性，表明BMSCs經(jīng)礦化誘導(dǎo)后表現(xiàn)為成骨細(xì)胞的特點(diǎn)與表征。②大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在骨向分化過程中cx3c11基因表達(dá)上調(diào)，與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞自然傳代生長(zhǎng)相比，該基因表