2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、本文以三個(gè)草莓(Fragaria×ananassa Duch.)品種為試驗(yàn)材料,用草莓的匍匐莖莖尖為外植體建立草莓無菌繁殖體系,并對(duì)其進(jìn)行病毒檢測及脫毒處理。研究的主要目的是對(duì)莖尖培養(yǎng)脫除幾種草莓常見病毒(SCV,SMoV,SMYEV,SVBV)的脫毒方式和PCR病毒檢測體系的改良和優(yōu)化。本研究主要內(nèi)容包括:
 ?、挪葺俁NA提取方法的優(yōu)化。提取草莓葉片中優(yōu)質(zhì)的總RNA,改良CTAB法與植物RNAOUT及植物柱式RNAOUT相比

2、,無論從提取的RNA質(zhì)量和純度上(OD260/OD230,OD260/OD280的值分別約為1.9和2.0,濃度也達(dá)到20mg/ml以上),還是從它的成本上,都不失為本試驗(yàn)中最佳提取總RNA的方法。
 ?、扑姆N植物病毒特異片段和植物內(nèi)源mRNA專化內(nèi)標(biāo)的篩選及多重PCR引物的設(shè)計(jì)。用于PCR檢測的引物對(duì)最終確定為SD1/SD2、D1/D3、Y1/Y2、SVl/SV2、N1a/N1b、N1a/N2b,后兩個(gè)為分別來自‘顛茄’的線粒體

3、NADH脫氫酶ND2亞基上基因的特異內(nèi)標(biāo)引物,目的片段的大小分別為345bp、219bp、271bp、422bp,571bp和188bp。
 ?、嵌嘀豍CR反應(yīng)體系的優(yōu)化及四種植物病毒檢測方法的建立。PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化包括20μl體系和程序設(shè)計(jì)。獲得的最佳RT-PCR草莓病毒檢測體系為:1μl cDNA、10×PCR buffer、1.5mmol/L MgCl2、0.2 mmol/L dNTPs、0.5U Taq酶,引物濃度0.

4、1μmol/L,用超純水補(bǔ)充至20μl; PCR程序:94℃預(yù)變性5min,94℃變性1min,54℃退火40s,68℃延伸1.5min,35個(gè)循環(huán),68℃再延伸10min。
 ?、炔葺o尖超低溫脫毒體系的建立。通過莖尖培養(yǎng)結(jié)合超低溫處理的方法對(duì)檢測含有相應(yīng)病毒的草莓進(jìn)行脫毒,通過對(duì)影響超低溫處理過程中莖尖成活率的幾個(gè)主要因素進(jìn)行研究,篩選出適合的脫毒方式,便于生產(chǎn)應(yīng)用。以‘豐香’草莓莖尖為材料,對(duì)影響超低溫處理過程中莖尖成活率的

5、幾個(gè)主要因素進(jìn)行研究,結(jié)果表明:預(yù)培養(yǎng)時(shí)間1d,蔗糖濃度為0.5mol/L,裝載時(shí)間30min,PVS2液處理時(shí)間60min組合時(shí)莖尖成活率最高,可達(dá)50%。同時(shí)還比較了其它因子如:莖尖大小、液氮處理時(shí)間、化凍方式對(duì)成活率的影響,結(jié)果表明:切取的0.5~0.8mm莖尖、液氮處理24h以及40℃水浴化凍后的莖尖成活率是比較高的。
 ?、汕o尖超低溫脫毒及其效果檢測。以同時(shí)帶有SCV,SMoV,SMYEV,SVBV的‘豐香’草莓組培苗為

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