轉(zhuǎn)錄因子Sp1反義寡核苷酸對肝星狀細(xì)胞凋亡、Sp1活性、ICAM-1及PDGF-B的影響.pdf

1、[目的]通過轉(zhuǎn)染Sp1反義寡核苷酸(ASODN)進入大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC-T6)，了解HSC的凋亡和Sp1活性，以及其產(chǎn)生細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)及血小板源性生長因子-B(PDGF-B)的改變，探討Sp1 ASODN治療肝纖維化的可能機制，為利用SP1 ASODN治療肝纖維化提供理論基礎(chǔ)。
　　 [方法]取第3-6代生長良好的大鼠HSC細(xì)胞，人工合成SP1 ASODN并行全程硫代磷酸化修飾。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染SP1 A

2、SODN進入HSC，臺盼藍染色排斥法檢測SP1 ASODN對HSC的毒性實驗。流式細(xì)胞儀檢測脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染SP1 ASODN對HSC凋亡的影響。采用凝膠遷移率試驗(EMSA)法檢測SP1 ASODN對TNF-α刺激HSC的SP1活性影響。應(yīng)用RT-PCR和ELISA方法檢測脂質(zhì)體介導(dǎo)的不同濃度SP1ASODN(0、0.1、0.5、0.8、1.0μmol/L)對TNF-α刺激HSC產(chǎn)生ICAM-1及PDGF-BmRNA和蛋白的影響。
　

3、　 [結(jié)果]毒性實驗表明，SP1 ASODN在0.1～1.0μmol/L濃度對于體外培養(yǎng)傳代大鼠HSC無明顯毒性。TNF-α刺激HSC后SP1活性增強，應(yīng)用SP1 ASODN(0.1～1.0μmol/L)作用后，SP1活性明顯減弱，呈劑量依賴性(P<0.05)。SP1ASODN濃度在0.1～1.0μmol/L時誘導(dǎo)HSC的凋亡，以濃度1.0μmol/L作用最明顯，呈劑量依賴性(P<0.05)。轉(zhuǎn)染SP1 ASODN(0.1-1.0μm

4、ol/L)明顯減少TNF-α誘導(dǎo)HSC的ICAM-1、PDGF-B的mRNA表達和蛋白分泌，亦呈劑量依賴性(P<0.05)。
　　 [結(jié)論]Sp1 ASODN在0.1～1.01μmol/L濃度對于HSC-T6無明顯毒性，為轉(zhuǎn)染Sp1 ASODN進行肝纖維化治療提供可能性；轉(zhuǎn)染Sp1 ASODN進入活化的HSC后，能特異性降低Sp1的活性，從而削弱Sp1的促增殖作用，減少ICAM-1、PDGF-B等Sp1下游致纖維化因子的表達，為