慢性乙型肝炎肝纖維化患者外周血CD4+CD25+CD127dim--T細(xì)胞的初步研究.pdf

1、[目的]
　　1.觀察慢性乙型肝炎各纖維化期患者外周血CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞頻率變化并探討其意義。
　　2.初步研究慢性乙型肝炎肝纖維化患者外周血CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞的抑制功能，探討其在肝纖維化病程中的作用。
　　[方法]
　　1.患者分組:按纖維化程度S分期分別將29例經(jīng)B超定位下行肝穿刺組織活檢診斷為肝纖維化的慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者分為S1期組、S2-S

2、3期組和S4期組。
　　2.外周血CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞頻率檢測:流式細(xì)胞術(shù)(FCM)分別檢測9例健康對照者和29例慢性乙型肝炎肝纖維化患者外周血CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞頻率。
　　3.外周血CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞分選:利用磁激活細(xì)胞分選法(MACS)分別從4例健康對照者和9例慢乙肝肝纖維化患者外周血單個核細(xì)胞(PBMC)中先陰性分選CD4+CD127dim/-

3、T細(xì)胞，再陽性分選獲取CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞。
　　4.CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞純度鑒定:采用FCM檢測分選后的細(xì)胞的純度。
　　5.CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞存活率檢測:臺盼藍(lán)染色計活細(xì)胞比例計算分選后細(xì)胞的存活率。
　　6.CD4+CD25+CD127dim/T細(xì)胞抑制試驗:抗CD3單抗、抗CD28單抗和hIL-2細(xì)胞因子包被96孔U型板后，分別將分選獲取

4、的CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞與CD4+CD25CD127highT細(xì)胞（效應(yīng)性T細(xì)胞）按0∶1、1∶1、1∶4、1∶0于96孔U型板中共培養(yǎng)6天，收集細(xì)胞，通過計數(shù)計算細(xì)胞的抑制率來觀察CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞的抑制功能。
　　[結(jié)果]
　　1.按纖維化程度S分期，將29例慢性乙型肝炎肝纖維化患者分為S1期組9例、S2-S3期組11例和S4期組9例。
　　2.隨著肝纖維化程度的加重

5、（從S1期到S4期），患者外周血CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞頻率逐漸減少(p＜0.05)，分別為S1期組（6.27％±0.84％）顯著高于健康對照組的(5.09％±0.59％)(p＜0.05)，S2-S3期組(5.13％±1.24％)與健康對照組無顯著差異(p＞0.05)，S4期組(3.91％±1.29％)顯著低于健康對照組(p＜0.05)。
　　3.分選獲取的CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞經(jīng)FCM檢

6、測純度為（90.57％±6.38％）
　　4.分選后的細(xì)胞經(jīng)臺盼藍(lán)染色存活率為(98.25％±1.55％)。
　　5.健康對照組和慢性乙型肝炎肝纖維化組患者外周血CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞均呈低增殖狀態(tài)且兩組之間無顯著差異(p＞0.05)，兩組1∶1的抑制率分別為（94.71％±4.95％）和(95.17％±3.65％)，1∶4的抑制率分別為(76.69％±3.24％)和（71.12％±2.44％），兩組外

7、周血CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞均能顯著抑制效應(yīng)性T細(xì)胞增殖(p＜0.05)，但1∶1明顯強于1∶4(p＜0.05)。而健康對照組和慢乙肝肝纖維化組兩個同比例之間的抑制功能均無顯著差異(p＞0.05)。
　　[結(jié)論]
　　1.隨著慢乙肝患者肝纖維化進(jìn)展，外周血CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞頻率逐漸下降。
　　2.慢性乙型肝炎肝纖維化者外周血CD4+CD25+CD127dim/-T細(xì)胞呈數(shù)量